论文部分内容阅读
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发生发展是多因素、多环节、多基因作用的结果。许多研究显示花生四烯酸代谢的关键酶—环氧合酶-2(COX-2)在胃癌的发生发展中起重要作用,而前列腺素生物降解的关键酶—15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)与COX-2可能存在相互影响、相互制约的关系,两者之间的相互关系可能在胃肠道肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用。本研究从以下两个方面来探讨15-PGDH与COX-2在胃癌发生发展中的相互关系:第一章COX-2抑制剂对胃癌细胞生长及15-PGDH表达的影响目的:研究COX-2抑制剂对胃癌细胞生长、凋亡的调节作用以及对15-PGDH表达的影响,探讨胃癌细胞中15-PGDH和COX-2的可能关系。方法:应用选择性及非选择性COX-2抑制剂干预人胃癌细胞株SGC-7901,采用MTT法和流式细胞技术观察两类药物对胃癌细胞增殖、凋亡的影响;RT-PCR法检测药物干预前后胃癌细胞凋亡相关基因survivin、bcl-x1、bax基因表达的情况;RT-PCR及Western blotting法检测药物对胃癌细胞中15-PGDH、COX-2 mRNA及蛋白表达的影响。结果:吲哚美辛和塞来昔布均能抑制SGC-7901细胞的生长、促进其凋亡,其抑制作用呈时间/浓度依赖。RT-PCR检测显示,药物干预后,随着药物浓度和作用时间的递增, SGC-7901细胞中COX-2表达逐渐减低,bcl-x1和survivin mRNA表达较对照组亦显著降低,而15-PGDH和bax mRNA的表达则较对照组逐渐升高。Western boltting法检测显示吲哚美辛和塞来昔布干预后15-PGDH的表达较对照组显著增加。结论: COX-2选择性抑制剂塞来昔布和非选择性抑制吲哚美辛均可诱导胃癌细胞中15-PGDH表达,下调COX-2表达,提示胃癌中15-PGDH低表达与COX-2过表达相关,两者存在一定的制约关系。吲哚美辛和塞来昔布在诱导胃癌细胞中15-PGDH表达的同时下调抗凋亡基因survivin、bcl-xl的表达,上调促凋亡基因bax的表达,提示C0X-2抑制剂有可能通过促进15-PGDH表达,上调促凋亡基因的表达,下调抗凋亡基因的表达来促进凋亡,从而抑制肿瘤细胞生长。第二章15-PGDH抑制剂对胃癌细胞生长及COX-2表达的影响目的:应用15-PGDH抑制剂Cay10397干预人胃癌细胞株MKN-28,观察其对胃癌细胞生长、凋亡的调节作用以及对COX-2和15-PGDH表达的影响,探讨胃癌细胞中15-PGDH和COX-2的可能关系。方法:采用MTT法和流式细胞技术观察药物对胃癌细胞增殖、凋亡的影响;RT-PCR法检测药物干预前后凋亡相关基因survivin、bcl-x1、bax基因表达的情况;采用RT-PCR及Western blotting检测药物对胃癌细胞中15-PGDH、COX-2基因表达的影响。结果: 15-PGDH抑制剂Cay10397能促进MKN-28细胞增殖,其增殖作用呈浓度/时间依赖,在一定浓度范围内,随着药物浓度增加,作用时间延长,增殖作用越明显;RT-PCR及western blotting检测显示,Cay10397干预后MKN-28细胞中15-PGDH表达下降,同时bcl-x1和survivin mRNA表达增加,而bax mRNA表达则降低;COX-2表达无明显变化;流式细胞分析显示Cay10397干预对MKN-28细胞凋亡无明显影响。结论:抑制15-PGDH表达可促进胃癌细胞的增殖,但对COX-2表达无明显影响,提示胃癌细胞中15-PGDH与COX-2可能存在复杂的调节关系,共同影响胃癌的增殖和凋亡;15-PGDH可能通过下调抗凋亡基因survivin和bcl-x1的表达,上调促凋亡基因bax的表达,从而诱导胃癌细胞凋亡。