多浪羊有较高的繁殖力,具有初情期早的特点。为研究多浪羊初情期启动遗传机理,通过课题组前人转录组测序和筛出的差异表达基因POMC、CRH、CTSD,本研究在转录水平和蛋白水平检测了不同发育时期表达规律,并针对CTSD基因进行了细胞水平的功能研究,探讨差异基因表达对多浪羊初情期启动的影响与作用。本研究采用基因克隆,获得差异基因POMC,CRH,CTSD序列,进行了生物信息学分析;运用荧光定量PCR技术和Western Blot免疫印迹检测影响初情期启动基因POMC,CRH,CTSD在多浪羊不同发育时期的m RNA和蛋白质水平表达规律;成功分离绵羊卵巢颗粒细胞,构建颗粒细胞培养体系,将CTSD基因过表达载体转染进细胞中,Elisa法检测基因过表达后对相关生殖激素生成和相关基因Gn RH,Gn RHR,FHSR表达的影响。研究结果如下:通过基因克隆技术获得多浪羊POMC基因两条c DNA全长序列,一条长1108bp,另一条长1078bp,两条序列的CDS区都一样,均为792bp,编码263个氨基酸,与绵羊、牛、山羊、猪、马、人的同源性分别为99.62%、96.6%、96.3%;89.51%、83.08%、79.78%;获得CRH基因CDS区序列,长为573bp,编码190个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、人、家鼠、鸡的同源性分别为99.47%、99.47%、97.37%、75.77%、74.62%、63.40%、48.42%;获得CTSD基因CDS区序列,长为1239bp,编码412个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、人、家鼠、鸭、鸡分别为100%、98.5%、97.33%、86.17%、84.06%、78.6%、65.29%、64.56%。通过qRT-PCR技术和Western Blot检测了三个候选基因在多浪羊幼年期、初情期、初情期后生殖轴相关组织中的表达量。得出POMC基因在多浪羊垂体组织中表达量最高,其次是下丘脑,都显著高于其他组织（P＜0.05）,幼年期的表达量最高,到达初情期、初情期后呈显著下降（P＜0.05）;CRH基因在多浪羊下丘脑组织中表达量最高,幼年期到初情期CRH下降,但差异不显著（P＞0.05）,初情期后则呈不显著上升趋势（P＞0.05）;CTSD基因在5个生殖组织中均较高有表达,但在卵巢中的表达量最高,幼年期到初情期为升高趋势,差异显著（P＜0.05）,初情期后则呈不显著下降趋势（P＞0.05）。构建CTSD基因的过表达载体,转染卵巢颗粒细胞试验得出过表达CTSD基因会促进雌二醇和孕酮分泌,对初情期相关基因Gn RH、Gn RHR、FSHR m RNA表达起到抑制作用。综上所述,CTSD基因可能直接或间接影响生殖激素分泌,调控相关生殖基因的表达。