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[目的] 应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测组胺H4受体(HH4R)、组胺N-甲基转移酶(HNMT)和二胺氧化酶(DAO)在人原发性肝癌组织中的表达情况,初步探讨其意义。对人原发性肝癌组织中HNMT基因314位点进行了分型研究,期望揭示C-T多态性与肝癌之间的联系。 [方法] 选择80例新鲜肝组织标本,运用Trizol试剂从肝组织中提取总RNA,RT-PCR方法研究人类HH4R、HNMT和DAO基因的mRNA在肝脏的表达情况,并选用GAPDH的mRNA为内参照对目的基因进行半定量测定;HPLC法测定组胺含量;聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法分析HNMT基因314位点多态性。 [结果] 正常肝脏组织、原发性肝癌和癌旁组织中HH4R基因的阳性表达率分别是100%(16/16),100%(32/32)和93.75%(30/32),三组阳性表达率无差异(P=0.2147>0.05)。但三组HH4R基因mRNA平均表达量间的差异性显著(P<0.05),由正常组、癌旁组到癌症组HH4R基因mRNA平均表达量呈现递减趋势(分别为0.6108±0.0812、0.5425±0.0538、0.3557±0.0710),说明在肝癌发生和形成的过程中HH4R基因的表达显著降低。 人正常肝脏组织、原发性肝癌和癌旁组织中HNMT基因mRNA阳性表达率分别是87.5%(16/18)、90.625%(29/32)和81.25%(26/32),三组阳性表达率无显著性差异(P=0.5455>0.05)。癌症组HNMT基因的mRNA平均表达量明显高于正常组和癌旁组;而癌旁组的表达量低于正常组(分别为0.8874±0.0646、0.5639±0.0509、0.7686±0.0419,均P<0.01),相应的,三组标本中DAO基因mRNA阳性表达率分别是81.25%(13/16)、87.5%(28/32)和78.125%(25/32),三组阳性表达率间无显著性差异(P=0.6078>0.05)。癌症组DAO基因的mRNA平均表达量明显高于正常组和癌旁组;而癌旁组的表达量低于正常组(分别为0.5763±0.0532、0.2831±0.0413、0.4814±0.0509,均P<0.01)。2001级硕士研究生学位论文人原发性肝店组织中HH承、H茂MT和DAO基因及意义 比较正常肝脏组织、原发性肝癌和癌旁组织中HNMT基因和DAO基因表达量,可见HNMT明显强于DAO?<0.05),说明HNMT在肝脏组胺代谢中居于主导地位。分析原发性肝癌组织中HNMT、DAo和HH4R InRN.A表达间的关系,可见三者的相关性均显著(尸<0.05)。检测和比较各实验组标本中组胺含量,可见人原发性肝癌组>癌旁组>正常肝脏组(P<0.05)。分析肝癌组织和正常肝脏组织中HNMT基因C314T位点的突变情况,可见肝癌患者c一T突变(18.75%)高于健康人群(6 .25%)。 【结论】 1.人肝脏组织中大量存在组胺氏受体的表达,且正常组织>癌旁组织>癌组织;人肝脏中组胺受体可能以风受体表达为主,在人原发性肝癌发展过程中,HH4R表达呈降低趋势。 2.组胺的两个代谢酶,HNMT和DAO在肝癌组织中表达增强,HNMT和DAO可能在肝癌发生发展过程中存在活性诱导作用;人类肝脏中组胺代谢主要通过HNMT的N位甲基化途径而DAO的非氧化代谢途径。 3.人原发性肝癌组织标本中内源性组胺含量显著增高,肿瘤组织细胞本身可能合成组胺,大量组胺对肿瘤的发展起一定作用。 4.人原发性肝癌人群HN毛在T基因C一突变高于健康人群。