论文部分内容阅读
目的:病理性瘢痕的防治是医学领域的重要课题,本研究通过比较病理性瘢痕与正常皮肤组织中DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)是否存在差异,探讨Topo I特异性抑制剂羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖的影响,细胞周期的影响及其对细胞凋亡的诱导作用,以期了解HCPT对成纤维细胞的药理作用。方法:(1)手术切除的病理性瘢痕组织标本21例(年龄18～40岁;男性15例,女性6例;病程在烧伤创面愈合后6～9个月,在此期间没有接受过针对瘢痕的各种治疗);同一病人多余的正常皮肤组织标本21例作为对照组;采用免疫组化的方法检测拓扑异构酶I的表达。(2)体外培养人病理性瘢痕成纤维细胞。1)选取羟基喜树碱2～1000ng/ml共10个药物梯度,分别选取24小时,48小时,72小时3个时间段,采用MTT法检测羟基喜树碱对成纤维细胞生长的抑制作用。2)采用流式细胞仪定量检测羟基喜树碱5个药物浓度(31, 63, 125, 250,500ng/ml)处理24h后成纤维细胞细胞周期的改变及凋亡的百分率。3)500ng/ml浓度的羟基喜树碱干预24小时后采用DNA片段化分析方法研究其对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡的诱导作用。结果:(1)TopoI在人病理性瘢痕和正常皮肤组织的角质形成细胞,成纤维细胞中均有表达。正常皮肤中,角质形成细胞及成纤维细胞各有3例免疫组化阳性;病理性瘢痕组织中,角质形成细胞及成纤维细胞各有7例和12例呈阳性。正常皮肤角质形成细胞TopoI阳性表达率为14.3%,病理性瘢痕组织表达率为33.3%,差异无明显不同(P=0.1473);正常皮肤成纤维细胞Topo I阳性表达率为14.3%,病理性瘢痕阳性总表达率为57.1%,存在明显差异(P=0.0038)。(2)1)羟基喜树碱对成纤维细胞的增殖有明显抑制作用,并且有明显的剂量依赖性(相关系数为0.8675,P=0.0024)。作用24小时,48小时,72小时,IC50分别为:233ng/ml,176ng/ml及103ng/ml,无明显时间依赖性。2)羟基喜树碱能使S期细胞增多,并且能诱导人病理性瘢痕成纤维细胞产生凋亡,在作用时间为24小时,药物浓度达到250ng/ml时,细胞可出现明显的凋亡峰,成纤维细胞随羟基喜树碱药物浓度增加而凋亡增加。3)500ng/ml羟基喜树碱药物干预成纤维细胞24小时后,提取出来的DNA经过1%琼脂糖凝胶电泳,呈现为细胞凋亡后特异梯状条带。结论:在病理性瘢痕组织成纤维细胞中,拓扑异构酶I的表达明显高于正常皮肤成纤维细胞;羟基喜树碱能够抑制体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞的增殖,使S期细胞增多,能诱导成纤维细胞产生凋亡,且随羟基喜树碱药物浓度增加而凋亡增加。