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目的:婴幼儿血管瘤(Infantile hemangioma,IH)是婴幼儿时期最常见的良性肿瘤。IH的细胞成分在生长和退化的整个生命周期中不断变化,以增殖期为主的内皮细胞在退化期逐渐减少。相反,脂肪细胞增多,最终在退化期占主导地位。然而,在整个自发退化过程中促进脂肪生成的机制尚不清楚。我们课题组前期研究已证实,胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)可促进血管瘤干细胞(Hemangioma stem cells,Hem SCs)的增殖,促进Hem SCs向脂肪细胞的分化。此外,已有相关研究证实,微小核糖核酸(micro ribonucleic acids,mi Rs)可能在调节胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor-1receptor,IGF-1R)中发挥关键作用。我们通过预实验发现,在Hem SCs中mi R-139-5p的表达可能与IGF-1R呈负相关。所以,我们的研究旨在探讨mi R-139-5p在Hem SCs中的作用机制。由于目前对IH的治疗有限,mi R-139-5p可能成为IH新的潜在的治疗靶点。方法:(1)收集20例1岁以内婴幼儿的增殖期草莓状血管瘤标本,将其剪切消化得到乳糜状悬液,再用CD133免疫磁珠法选出Hem SCs,培养传代至第三代。(2)将mi R-139-5p模拟物及空白对照或mi R-139-5p抑制剂及空白对照对对应分组的Hem SCs进行转染处理培养24小时,得到mi R-139-5p mimics NC、mi R-139-5p mimics、mi R-139-5p inhibitor NC、mi R-139-5p inhibitor组。(3)分别使用逆转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcriotion-quantity polymerase chain reaction,RT-q PCR)及蛋白免疫印迹试验(Western blotting,WB)测定四个分组中mi R-139-5p及IGF-1R的表达量。(4)构建分别含有IGF-1R野生型(IGF-1R wild-type,IGF-1R-WT)和IGF-1R突变型(IGF-1R mutant,IGF-1R-Mut)的质粒,使用双荧光素酶报告基因测定阴性对照组(negative control,NC)、IGF-1R-WT组及IGF-1R-Mut组中mi R-139-5p与IGF-1R表达之间的关系。(5)转染后继续培养24小时后对部分组别再加入IGF-1(100ng/ml)进行处理,继续培养24小时,得到mi R-139-5p mimics NC、mi R-139-5p mimics、mi R-139-5p inhibitor NC、mi R-139-5p inhibitor、IGF-1、IGF-1+mi R-139-5p mimics、IGF-1+mi R-139-5p inhibitor组。(6)使用细胞增殖/毒性检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8)研究测定七个分组的Hem SCs在不同时间的生长曲线。(7)使用细胞迁移实验(transwell migration assay)比较七个分组中Hem SCs的迁移能力。(8)使用油红O染色法确定空白对照组(control)、IGF-1组、IGF-1+mi R-139-5p mimics组及IGF-1+mi R-139-5p inhibitor组的脂滴多少及有无。(9)分别使用PCR及WB测定比较七个分组的Hem SCs中脂肪转化因子(C/EBP-α,C/EBP-β,PPAR-γ)的表达情况。结果:(1)mi R-139-5p过表达可降低IGF-1R的表达量,mi R-139-5p抑制可升高IGF-1R的表达量。(2)双荧光素酶报告基因结果证实IGF-1R是mi R-139-5p的靶基因。(3)CCK-8实验表明mi R-139-5p过表达可以通过靶向IGF-1R抑制Hem SCs的增殖,而抑制mi R-139-5p则可促进Hem SCs的增殖。(4)Transwell实验表明mi R-139-5p过表达可以通过靶向IGF-1R抑制Hem SCs的迁移,而抑制mi R-139-5p则可促进Hem SCs的迁移。(5)通过油红O染色发现IGF-1处理可刺激Hem SCs中的脂肪生成和脂质积累。此外,mi R-139-5p过表达抑制了IGF-1诱导的脂质积累,而mi R-139-5p抑制则增强了IGF-1诱导的脂质积累。(6)RT-q PCR和WB分析证实IGF-1可以促进Hem SCs中的三种脂肪转化因子的表达,而mi R-139-5p过表达抑制了IGF-1对三种脂肪转化因子表达的诱导作用,而mi R-139-5p抑制则更加增强了IGF-1对三种脂肪转化因子表达的诱导作用。结论:mi R-139-5p可以通过调控IGF-1R的表达来影响IGF-1/IGF-1R通路,最终影响Hem SCs的增殖、迁移和脂肪生成。