利用高纯度银环蛇毒素及其抗体系统评估商业用抗银环蛇毒血清

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蛇是一类无足的爬行动物,是蛇亚目的统称,属于爬行纲。蛇类在自然界中有着重要的地位,是生物多样性的重要组成部分,它们有着漫长的进化历史,极其多样的种类,地理分布也极其广泛,几乎世界各处都有它们的分布。其中一部分蛇具有毒性,它们在进化过程中获得了毒素这一种武器,用于捕食猎物,同时这也是它们重要的自卫手段,并且随着蛇类的进化,蛇类毒素也是相当多样与复杂的,是生物活性多肽和蛋白来源的天然宝库,在药物研发以及疾病治疗方面有着天然的优势。本研究的主要研究对象是银环蛇毒素(bungarotoxins,BGT)。银环蛇(Bungarus multicinctus)是陆地第四大毒蛇,也是我国内陆毒性最强的蛇。银环蛇毒素是国际上脊椎动物中唯一的列为潜在毒素战剂的肽类分子,也是中国致死率最高的毒蛇之一。银环蛇毒素是神经毒素,主要包括α-bungarotoxin,β-bungarotoxin,γ-bungarotoxin,κ-bungarotoxin,其中β-bungarotoxin 是四种毒素中含量最高的,属于突触前神经毒素,具有磷脂酶A2活性;其余三种银环蛇毒素都属于突触后神经毒素,属于三指型毒素。目前银环蛇毒素被国际列为生物武器红色名单,为了应对潜在的生物武器威胁,需要对银环蛇毒素不同组份进行研究,构建起不同毒素的检测方法,毒性差异比较以及抗体保护中和能力评估。本研究主要针对β-bungarotoxin,首先构建起β-bungarotoxin分离纯化流程,通过小鼠实验测得其半数致死剂量(LD50),并与其它分离的组份进行毒性比较。确定β-bungarotoxin是其中毒性最强含量最多的毒素。之后分别制备不同毒素的特异性抗体,通过中和保护实验与我国市面购买的商用抗银环蛇毒血清作比较,并与我国内陆九种毒蛇之间进行交叉中和实验,我们发现β-bungarotoxin抗体与α-bungarotoxin能特异的检测出银环蛇毒素,此外我们也发现抗银环蛇毒血清对眼镜王蛇毒素具有一定的中和作用,但对金环蛇毒素和眼镜蛇毒素没有保护作用。这对临床上抗蛇毒血清的应用具有一定的指导意义。
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