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系统性红斑狼疮(systemic lupus erythema.tosus,SLE)是一种以免疫调节紊乱为特征的自身免疫病,其主要表现为免疫系统的过渡激活和紊乱以及由此产生大量的自身反应性抗体。研究发现许多细胞因子的异常对SLE的发展及其转归具有十分重要的意义,但对具有抑制免疫和炎症的细胞因子一转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的研究较少。TGF-β1是一种有效的负性免疫调节因子,可作用于免疫系统的各个环节,如抑制多种免疫细胞的增殖分化和细胞因子的分泌,抑制B细胞分泌IgG及IgM和抑制抗原递呈细胞(APC)表面MHCⅠ类及Ⅱ类分子表达等。体外研究发现TGF-β1抑制T、B淋巴细胞的增殖和分化,TGF-β1的降低使得淋巴细胞的激活增加,导致致敏T淋巴细胞和多种自身抗体的产生,而发生自身免疫性疾病。敲除了TGF-β1基因的小鼠的症状与人SLE、干燥综合征极其类似,可出现多脏器炎症细胞浸润,外周血中可检测到抗dsDNA、抗ssDNA及其它抗核抗体等。因此推测它的免疫抑制功能在SLE的发病中起到一定作用。
骨髓由造血干细胞(HSCs)和骨髓造血微环境组成,构成骨髓造血微环境的核心是骨髓基质细胞,骨髓基质细胞是由成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等构成,具有支持造血和免疫调节功能,并能分泌多种细胞因子调节细胞增殖,TGF-β1为骨髓基质细胞分泌的主要细胞因子之一。有学者提出SLE不仅存在HSCs异常,而且还存在骨髓基质细胞异常。具体表现为狼疮鼠骨髓基质细胞不能支持正常鼠HSCs生长,异基因HSCs和骨髓基质细胞共移植时,狼疮鼠生存明显延长,且能预防移植物宿主病(GVHD),免疫和造血重建快:人活动期SLE患者骨髓基质细胞上清液对正常及自身骨髓HSCs具有抑制作用。另有文献提示SLE患者骨髓基质细胞培养上清液对淋巴细胞的增殖有抑制作用,这种抑制作用比正常人弱,在SLE患者骨髓基质细胞培养上清液中加入TGF-β1的单抗后,抑制作用明显减弱,由此推测SLE患者骨髓基质细胞存在分泌TGF-β1缺陷,并且TGF-β1在骨髓基质细胞培养上清液的免疫抑制功能中起着重要作用。但是SLE患者体内的TGF-β1水平如何;不同活动指数的SLE患者体内TGF-β1水平如何;是否与SLE活动指数(SLEDAI)有关; SLE患者骨髓基质细胞生长情况如何,及其分泌TGF-B1的水平如何;目前研究较少,本实验希望通过对SLE患者血清及骨髓基质细胞培养上清液中TGF-β1水平的研究,探讨SLE的发病机制,为SLE的治疗提供新的思路和方法。
材料和方法
1材料
1、l血清标本采自我院血液风湿科住院及门诊的SLE患者,诊断均符合1982年美国风湿病协会(ARA)的诊断标准,并以自愿献血的健康人作为对照组.
1、2骨髓标本采自我院血液风湿科住院贫血SLE患者,诊断均符合1982年美国风湿病协会(ARA)的诊断标准,并以缺铁性贫血的患者作为对照组。
2、实验步骤及方法2、1血清标本采集:取符合条件的患者及对照组外周静脉血3ml,于6小时内分离血清,-20℃冻存待用。
2、2骨髓标本采集:取符合条件的患者及对照组骨髓液3ml(肝素抗凝20IU/ml),于6小时内,密度离心法分离单个核细胞(MNCs),并应用骨髓基质细胞培养法进行4周细胞培养,取其上清液,-20℃冻存待用。
2、3用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA法)对上述血清、骨髓标本中的TGF-β1进行检测。同时测定SLE患者疾病活动性指标(血沉、补体C3)。
3、统计方法
实验数据以Means±SD表示,组间比较采用t检验,两者间关系采用Pearson相关分析。以上均采用SPSS15.0统计软件包完成。
结果
1、体外培养骨髓基质细胞生长状态:活动期SLE组骨髓基质细胞于培养第1周出现;2-3周,基质细胞数逐渐增多;4周时,细胞生长比较旺盛,铺满约85﹪-90﹪培养瓶底。而对照组基质细胞于培养第5天开始出现,2周时已明显增多,3周时细胞彼此相接,4周时几乎完全融合。
2、SLE患者组血清TGF-β1水平低于对照组(p<0.01);轻度SLE患者组血清TGF-β1水平较对照组减低(p
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