Z-ajoene对肿瘤细胞增殖抑制作用机制的研究

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目的:Z-ajoene是一种从大蒜中提取的含硫简单化合物.关于Z-ajoene抗肿瘤活性的分子机制尚不完全清楚.该研究工作采用细胞生物学及分子生物学方法对Z-ajoene抗肿瘤作用的机理,包括Z-ajoene对肿瘤细胞的生长抑制作用,诱导凋亡,细胞周期阻断及端粒酶活性抑制作用的分子机制进行了深入研究.方法:应用MTT及SRB法测定Z-ajoene对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用.采用流式细胞术分析Z-ajoene作用后HL-60细胞在G0/G1期、S期及G2/M期细胞数量的变化.Z-ajoene诱导的细胞凋亡采用AnnexinV-FITC-PI双染法进行检测.Western-blot蛋白印记法测定凋亡及细胞周期相关蛋白的表达.RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA水平的变化.同时,应用TRAP法测定Z-ajoene对端粒酶活性的影响,并采用RT-PCR方法测定端粒酶hTRT和TP1mRNA的表达.结果:Z-ajoene对多种人肿瘤细胞株均有不同程度的抑制作用.对七种肿瘤细胞的作用强度依次为HL-60>KB>Hela>Bel-7402>HCT>BGC-823>MCF-7.IC<,50>值从HL-60细胞的10.1μM到MCF0-7细胞的26.6μM.20μMZ-ajoene作用12hr后的HL-60细胞中凋亡细胞的比例明显增加,在48hr时达到顶峰.同时,Z-ajoene诱导的细胞凋亡呈浓度依赖性,药物作用12hr后,凋亡细胞的比例从5μM作用后的23.8﹪增加到40μM作用后的65.7﹪.进一步检测Bcl-2蛋白的表达,发现20μMZ-ajoene作用权2hr后,即发生Bcl-2蛋白的磷酸化,作用持续至12hr,早于细胞凋亡的发生.RT-PCR的结果表明,Z-ajoene作用6hr后Bcl-2及caspase3基因的表达量显著降低,而BaxmRNA的水平有所增加.10μMZ-ajoene作用后能明显将HL-60细胞阻滞于G2/M期.G2/M期细胞的比例在药物作用10hr后达到顶峰,相对于对照组增加了195﹪.另外,10μMZ-ajoene作用后出现cyclinB1蛋白的聚集及p34蛋白表达的降低,但cyclinA蛋白的水平并无显著性变化.通过检测Z-ajoene作用后HL-60细胞端粒酶活性的变化,发现在药物作用24hr之后,端粒酶活性显著降低.而不同浓度的药物作用12hr,端粒酶活性均无显著性变化.在10μMZ-ajoene作用24hr后,能够降低端粒酶hTRT和TP1mRNA的水平.结论:Z-ajoene在体外对多种人肿瘤细胞系均有不同程度的抑制作用.
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