背景:急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia,AML)是目前成人最常见的血液系统恶性肿瘤之一,在细胞形态学、分子生物学、细胞遗传学、免疫分型、临床表现等方面具有高度异质性。AML的发病机制十分复杂,到目前为止,科学家们还不能完全将之阐述清楚。现在公认对疾病发生发展有重要启动作用的包括染色体核型异常和可重现性的基因突变。通过对这两个因素的分类,可以对大部分病人进行危险分层,根据病人不同的危险分层,采用相应的治疗方案,使得AML患者的五年生存率有显著的提高。但是,部分患者预后仍然不佳,提示临床医生需要进一步探索AML新的发病机制,完善现有的预后评估系统。因此,迫切需要发现新的预后因子并探讨这些预后因子在AML中发挥的功能,从而完善现有的评估系统。近年来,随着科学家们对表观遗传学认识的不断深入,越来越多的证据表明其在AML发生发展中发挥着重要的作用。microRNAs(miRNAs)作为表观遗传学中重要的一员,在AML中的作用正越来越受到重视起来。MiRNAs是一类长度为18-25个核苷酸,具有在转录后调控基因表达水平的非编码小RNA,可通过特异性结合靶基因的3’非翻译区(3’UTR)上的互补序列,从而下调靶基因的表达水平。目前已有很多文献表明miRNAs的表达异常和AML的发生发展有着密切的联系。目的:收集AML患者和正常对照的标本,利用荧光定量PCR检测miR-320c的表达情况,分析miR-320c的表达和AML患者预后之间的关系,探索miR-320c表达下调的调控机制,采用获得性功能实验观察miR-320c在AML细胞株中的生物学功能,利用生物信息学网站和荧光素酶双报告系统寻找miR-320c下游直接作用的靶基因,并进一步分析靶基因对AML患者预后的影响、对AML细胞株生物学表型的调节以及对下游信号通路的调控。方法:(1)利用定量PCR手段检测304例AML患者及正常对照中miR-320c的表达水平,统计学分析miR-320c表达和AML患者预后之间的关系;(2)探讨miR-320c低表达是否和其启动子区CpG岛高度甲基化相关;通过转染miR-320c模拟体(mimic)外源性过表达miR-320c来进行获得性功能实验,通过MTS、集落形成实验、流式检测细胞凋亡和细胞周期、WfesternBlot检测相关蛋白的改变等来探索miR-320c在AML中的生物学功能;利用生物信息学网站对miR-320c的靶基因进行预测,通过荧光定量PCR和WesternBlot检测靶基因RNA及蛋白水平的改变,荧光素酶双报告实验验证miR-320c和靶基因之间的关系;(3)检测304例AML患者及正常对照中靶基因的表达水平,分析靶基因表达和AML患者预后之间的关系;干扰靶基因表达,模拟miR-320c过表达在AML中发挥的作用,探索靶基因的生物学功能,明确靶向调控关系及其下游调控机制。结果:(1)和正常对照相比miR-320c在AML患者中表达显著下调,miR-320c低表达患者的OS较差,miR-320c高表达水平是AML患者的预后良好的独立因素;(2)去甲基化药物地西他滨处理AML细胞株THP-1、MV4-11和AML-OCI3后,可诱导miR-320c的表达上调;(3)过表达miR-320c可以通过PI3K/AKT及凋亡信号通路抑制AML的细胞活性、增殖及克隆形成能力,诱导细胞凋亡;(4)过表达miR-320c可以增加AML细胞对阿糖胞苷的敏感性;(5)利用生物信息学网站预测Musashi2(MSI2)是miR-320c的靶基因,并通过荧光定量PCR、WeesternBlot实验和荧光素酶双报告系统证实MSI2是miR-320c的下游靶基因;(6)和正常对照相比,MSI2在AML患者中表达上调,MSI2高表达患者年龄较大,NPM1和FLT3-ITD的突变率较高,CR率较低,OS和EFS较差;(7)慢病毒干扰MSI2的表达可以抑制AML细胞株的增殖,诱导细胞凋亡,并且可以下调MAPK及WNT通路。结论:(1)miR-320c在AML患者中显著低表达,miR-320c高表达水平是AML患者的预后良好的独立因素,低表达患者预后不良;(2)miR-320C低表达和其启动子区CpG岛高甲基化相关;(3)过表达miR-320c可以抑制AML细胞活性、阻碍细胞增殖、降低克隆形成能力,诱导细胞凋亡,下调PI3K/AKT通路活性,增加对阿糖胞苷的敏感性;(4)MSI2是miR-320c的直接靶点,MSI2在AML患者中高表达,MSI2过表达是AML患者的预后不良因素;(5)下调MSI2可以抑制AML细胞的增殖,诱导细胞凋亡,下调细胞内MAPK和WNT信号通路活性。