猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:kaifawendang06
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的急性接触性传染病, 1987年首次发生于美国,随后在世界各地传播。1996年郭宝清等首次报道本国分离到PRRSV病原,目前本病已成为危害养猪业的主要疾病之一。建立针对该病的快速、有效的检测方法是为我国猪群PRRSV进行流行病学调查及猪群免疫的重要基础。PRRSV ORF7编码病毒的核衣壳蛋白(N)是病毒的主要结构蛋白,免疫原性强且在型内高度保守。本实验根据PRRSV美洲型代表毒株的基因序列,设计了能够扩增其N基因的一对含有HindIII和BamHI酶切位点的引物,经RT-PCR技术克隆出大小为372bp的基因片段,将该片段克隆到pMD18-T载体,测序后,利用blast工具将其与GeneBank上美洲型代表毒株序列进行了比较,结果表明该基因与美洲型代表毒株序列完全同源。将此基因亚克隆到pRESTB表达载体中,构建了表达质粒pREST-N。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,用IPTG进行诱导表达,结果表达出约17.7ku的融合蛋白。蛋白大小与预期相符,经Western-Blot免疫印迹分析,该表达产物与兔抗PRRSV高免血清反应,说明PRRSV 核衣壳蛋白基因在原核系统获得有效表达,为进一步建立PRRSV免疫学诊断提供了重要的物质基础。
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