论文部分内容阅读
草酸青霉(P.oxalicum)是一种分布在土壤、根际、食物及动植物体内的丝状真菌,蕴含着丰富的次生代谢产物,但是迄今为止,对草酸青霉抗氧化物质的报道不多。故本研究从高抗氧化活性的内生草酸青霉出发,应用活性追踪的方法,对其SY-15的抗氧化作用物质基础进行了探究,其中包括抗氧化活性物质的分离鉴定、明确了SY-15起抗氧化活性的主要物质是一种聚酮类物质Popk-1,它含有氧杂蒽酮的母核[6]。并且测定其抗氧化活性及影响酿酒酵母抗氧化的作用机理分析。主要结果如下:
1.选用T-AOC法测定1mg/mL草酸青霉菌SY-15、SG-4、SJ-3、SJ-7、SFS-1、SFS-8、SFS-10、SFR-3、SFR-7、SFR-13、FS-19的发酵液粗提取物抗氧化活性,筛选到一株高抗氧化胁迫的内生真菌SY-15,,抗氧化活性为25.99U/mL。
2.对SY-15发酵液初提物进行抗氧化活性评价,结果显示SY-15发酵液酯相初提物具有一定程度的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率为93.95%,T-AOC法的抗氧化值为139.61U/mL,铁氰化钾还原力测定其吸光值为0.51分别达到VC的75.49%、148.57%、24.17%。
3.对SY-15的酯相初提物柱层析分析分离得到的20个样品进行抗氧化活性评价,结果显示SY-15-5和SY-15-6抗氧化活性相对较高,抗氧化值分别为94.23±1.14U/mL和143.19±0.84U/mL,分别为VC的104.43%和158.57%。
4.从SY-15-5酯相初提物中分离出一种主物质Popk-1,经UV、MS、NMR鉴定Popk-1为2,2’,6’-三羟基-4-甲基-6-甲氧基-酰基-二苯基甲酮。对Popk-1进行抗氧化活性评价,结果显示Popk-1自由基清除率达到80.67%,T-AOC法测定其抗氧化活性为70.66U/mL,铁氰化钾还原力测定其吸光值为1.43,与抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(Vc)相差很小。
5.将Popk-1溶液添加到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,BY4742)中,氧化胁迫测定酿酒酵母存活数量,同时为了初步探究其作用机理,测定了Popk-1对GSH2缺失型酿酒酵母Y11740的保护效果,结果表明Popk-1能有效地协助酿酒酵母抵抗干旱胁迫,且Popk-1可能通过调节谷胱甘肽产量途径来协助其抵抗氧化胁迫,Popk-1对GSH2基因较敏感。
6.琼脂糖凝胶电泳技术测定Popk-1对DNA TopⅠ作用效果,结果表明Popk-1对DNA TopⅠ有一定促进作用,能将DNA超螺旋结构解旋为螺旋结构。
1.选用T-AOC法测定1mg/mL草酸青霉菌SY-15、SG-4、SJ-3、SJ-7、SFS-1、SFS-8、SFS-10、SFR-3、SFR-7、SFR-13、FS-19的发酵液粗提取物抗氧化活性,筛选到一株高抗氧化胁迫的内生真菌SY-15,,抗氧化活性为25.99U/mL。
2.对SY-15发酵液初提物进行抗氧化活性评价,结果显示SY-15发酵液酯相初提物具有一定程度的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率为93.95%,T-AOC法的抗氧化值为139.61U/mL,铁氰化钾还原力测定其吸光值为0.51分别达到VC的75.49%、148.57%、24.17%。
3.对SY-15的酯相初提物柱层析分析分离得到的20个样品进行抗氧化活性评价,结果显示SY-15-5和SY-15-6抗氧化活性相对较高,抗氧化值分别为94.23±1.14U/mL和143.19±0.84U/mL,分别为VC的104.43%和158.57%。
4.从SY-15-5酯相初提物中分离出一种主物质Popk-1,经UV、MS、NMR鉴定Popk-1为2,2’,6’-三羟基-4-甲基-6-甲氧基-酰基-二苯基甲酮。对Popk-1进行抗氧化活性评价,结果显示Popk-1自由基清除率达到80.67%,T-AOC法测定其抗氧化活性为70.66U/mL,铁氰化钾还原力测定其吸光值为1.43,与抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(Vc)相差很小。
5.将Popk-1溶液添加到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,BY4742)中,氧化胁迫测定酿酒酵母存活数量,同时为了初步探究其作用机理,测定了Popk-1对GSH2缺失型酿酒酵母Y11740的保护效果,结果表明Popk-1能有效地协助酿酒酵母抵抗干旱胁迫,且Popk-1可能通过调节谷胱甘肽产量途径来协助其抵抗氧化胁迫,Popk-1对GSH2基因较敏感。
6.琼脂糖凝胶电泳技术测定Popk-1对DNA TopⅠ作用效果,结果表明Popk-1对DNA TopⅠ有一定促进作用,能将DNA超螺旋结构解旋为螺旋结构。