目的:通过小鼠长骨干骺端微血管组织培养,探讨骨组织中尤其是长骨干骺端微血管周细胞诱导和纯化的方法,为研究干骺端周细胞通过影响骨组织中血管形成参与骨质疏松的病理过程提供实验依据。方法:选取20只健康8周龄C57BL/6小鼠随机分为2组(OVX组和SHAM组)。OVX组行卵巢去势手术建立骨质疏松模型,SHAM组为伪手术组。建模完成后分别取SHAM组和OVX组小鼠干骺端骨组织制备石蜡切片进行免疫荧光标记(CD146,PDGFRβ和NG2)并观察微血管周细胞在干骺端的分布情况。SHAM组取股骨及胫骨干骺端切片,贴壁培养干骺端丰富的微血管组织,这其中包含微血管周细胞。原代培养并传代后利用选择性培养基(周细胞培养基)诱导纯化并利用蛋白免疫印迹实验检测神经胶质细胞2型硫酸软骨素糖蛋白(NG-2),血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)以及黑色素瘤细胞黏附分子(CD146)表达,鉴定是否符合周细胞特征。利用细胞免疫荧光和流式细胞技术鉴定诱导纯化后的细胞是否符合微血管周细胞特性。结果:蛋白免疫印迹和组织免疫荧光实验证实小鼠长骨干骺端存在微血管周细胞,且骨质疏松组较伪手术组干骺端微血管周细胞数量明显减少;通过小鼠长骨干骺端微血管组织培养并利用选择性培养基诱导纯化后得到的细胞经细胞免疫荧光实验证实其CD146,PDGFRβ和NG2阳性表达;蛋白免疫印迹实验证同样证实经诱导纯化后的细胞表达周细胞特异性蛋白CD146,PDGFRβ和NG2,流式细胞实验表明CD31阴性表达,经诱导纯化后的细胞符合周细胞特点,且细胞性质均一稳定,少有内皮细胞污染。结论:骨质疏松小鼠和健康小鼠相比,长骨干骺端微血管周细胞数量明显减少,且长骨干骺端微血管组织经选择性培养基培养并诱导纯化后可得到微血管周细胞,并具有生物活性,可以继续体外培养。为干骺端周细胞通过影响骨组织中血管形成参与骨质疏松的病理过程提供参考依据。