叶生小皮伞菌种的筛选、发酵工艺及药效学研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w_zhou
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目的:筛选出叶生小皮伞优良菌株;对其生物学特性进行考察,得出叶生小皮伞斜面生长的最佳条件;优化叶生小皮伞液体深层发酵工艺以及固体发酵工艺,为其工业化生产提供依据;对叶生小皮伞发酵产物中主要成分进行含量测定,为其质量控制提供参考;研究叶生小皮伞发酵产物对急性肺损伤的保护作用以及对偏头痛的治疗作用,探究其作用机制以及是否有代替现有药物的可能。方法:筛选出叶生小皮伞优良菌株,利用单因素考察和正交优化实验对其生物学特性进行考察;通过改变培养基的成分组成和培养条件,确定最适宜叶生小皮伞生长的液体发酵工艺;通过改变固体发酵的水分含量和接种块数,优化叶生小皮伞固体发酵工艺;利用苯酚硫酸法测定叶生小皮伞发酵产物中多糖的含量,通过HPLC法测定叶生小皮伞发酵产物中麦角甾酮以及麦角甾醇的含量;通过叶生小皮伞发酵产物对小鼠急性肺损伤的保护作用、对硝酸甘油诱导大鼠偏头痛的镇痛作用,研究叶生小皮伞发酵产物对上述疾病的治疗效果。结果:叶生小皮伞斜面培养的最佳条件是:蔗糖1%、酵母粉0.5%、MgSO4 0.05%、KH2PO4 0.1%、pH为5?6、温度25?C?30?C。叶生小皮伞液体深层培养的最佳条件是:麦芽糖3%、酵母粉2%、MgSO4 0.05%、KH2PO4 0.1%,pH为5?6之间,接种块数最佳为12块(100ml),装量为140ml,放罐天数为10天。叶生小皮伞固体培养基最佳的含水量为80%,接种块数为6块。苯酚-硫酸法测定叶生小皮伞发酵产物中多糖的含量为:发酵液中多糖含量为42.56mg/g,固体发酵产物中多糖的含量为33.43mg/g,菌丝中多糖的含量为19.61mg/g。利用HPLC测定发酵产物中麦角甾醇和麦角甾酮的含量:固体发酵产物中麦角甾醇的含量为0.0575mg/g、麦角甾酮的含量为4.5μg/g;菌丝中麦角甾醇的含量为0.13mg/g、麦角甾酮的含量为1μg/g。LPS诱发小鼠急性肺损伤实验,叶生小皮伞发酵产物降低肺部干湿重(W/D)比,降低了炎症反应。硝酸甘油诱发的大鼠偏头痛实验中,叶生小皮伞发酵产物升高血清中5-HT和脑干中DA、NE含量,降低炎症因子的含量。结论:筛选出叶生小皮伞的优良菌种,确定斜面培养基最佳组成及培养条件;确定叶生小皮伞生长的最佳液体发酵工艺,提高产量;确定最佳的固体培养工艺;测定叶生小皮伞发酵产物中麦角甾醇、多糖含量和麦角甾酮的含量,为其质量控制提供参考;LPS诱发小鼠急性肺损伤实验中,叶生小皮伞发酵产物降低炎症反应,调节细胞损伤,说明其对可能对急性肺损伤存在一些治疗效果;硝酸甘油诱发大鼠偏头痛实验中,叶生小皮伞发酵产物降低了神经递质中炎症因子的含量,可能是其对血管起到了调节作用,进而对偏头痛产生一些缓解的作用。
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