目的:通过物理方法和化学方法把透明质酸制成凝胶,将该类凝胶应用于动物的皮肤修复并探究其潜在的作用。方法:制备两种不同的水凝胶基透明质酸(HA):一种是由HA溶液的物理冻融过程制成(HA1),另一种是由HA和粘多糖化学交联而制成(HA2)。采用新西兰大白兔作为试验动物,建立全层皮肤损伤模型,并用HA粉末和无纺布作为参照,对受损皮肤修复。伤口用碘消毒后分别涂上HA2、HA1、HA和无菌无纺布(对照)后,伤口逐渐开始愈合。我们把他们分别记录为4种治疗组,HA2组,HA1组,HA组和对照组。在56天的时间内,为了对生物修复机制进行探讨,我们分别测量并统计了伤口区域面积的改变,血液中白细胞数量的变化,并进行了组织学形态观察。与此同时,我们还进行了免疫化学分析和实时PCR测试。结果:我们观察了术后28天的每一个时间点的外观改变,在4种治疗方法中,HA2组是所有组中伤口面积最小的。表明HA2组在伤口收缩和愈合加速方面有了很大的提升。白细胞检测的结果显示,HA2组动物在术后第17天第一次达到了最小的值,这说明着他们的炎症不及其他各组严重。当产生伤口后,第一个阶段的炎症减少对于伤口愈合有促进作用。其他组的动物炎症的严重程度为:HA1<HA<对照组,这与伤口表面观察的愈合过程相一致。H&E染色的结果显示了在不同的时间点上,对治疗进展的微观观察。从术后第3天开始,随着伤口的结痂,有大量的细胞分泌物从伤口处渗出。这时水凝胶会附着在伤口上,就像一张床,让新生的细胞能够粘附并四处移动,这对组织在伤口顶部形成保护皮肤的表皮是有益的。对于HA2组的动物,新生的表皮在术后第7天出现,随着时间的推移,慢慢的扩展到伤口中心。在第14天,炎症细胞逐渐开始减少,越来越像正常组织一样的稀疏。与HA1组、HA组和对照组的动物进行比较,HA2组的动物开始形成较成熟的表皮。同时,血管和毛囊等皮肤的附属物开始重新生成。在HA1组和HA2组动物的再生组织中发现,术后第14天时出现了毛囊,之后,与其他两组相比,他们的再生部分面积更大,伤疤区域的面积更小。直到第56天,在原始伤口的中心有一个完整的X形疤痕,并且没有观察到毛囊。在我们的实验中,HA2和HA1组在术后第7天α-SMA高表达,而对于HA组和对照组来说,在术后第14天他们获得了α-SMA的高表达。同时,实时定量PCR定量分析的结果也与这一结论相同。也就是说,HA2的水凝胶改善了α-SMA的分泌,这是有利于伤口收缩和血管生成的。第7天之后,HA2组和HA1组的动物体内的α-SMA表达量开始减少,直到第14天,这两组都比HA组和对照组的动物的下降的快。这表明HA2组中的α-SMA表达量比其他组(HA组、HA1组、对照组)下降的都快,这有利于减少肉芽组织的血管生成从而减少疤痕的形成。在术后第7天,在HA1组和HA2组的TGF-β1表达量要高于HA组和对照组。之后,HA1组和HA2组TGF-β1的表达量降低了。与其相反的是,在HA组和对照组中,TGF-β1表达量从第14天的时候反而增加了。这就是对照组动物的炎症比HA组、HA1组和HA2组更严重,并且HA2组的炎症最轻的原因。据此我们可以推断,在第14天之后,HA2组减少了TGF-β1的分泌,从而减轻了炎症,同时也减轻了疤痕的形成。我们的实验结果显示,HA1组和HA2组在术后第7天,VEGF的表达量达到了最高水平;而HA组和对照组在第14天表达量最高,并且HA组VEGF的表达量高于对照组。另外,与各组所有时间点做比较,HA2组中VEGF的表达量最高(ΔCt最低)。这表明了,HA2组的动物提高了VEGF的表达量,这有助于组织形成更多的血管以提供营养,从而加速了伤口修复的过程。虽然过多的VEGF表达可能导致最终的疤痕形成,但是在短时间内对伤口愈合是积极的。结论:通过对伤口区域的改变,白血细胞(WBC)测量和H&E染色观察,我们发现HA2水凝胶不仅是促进伤口愈合最有效的治疗方法,并且形成的疤痕最轻微。我们通过免疫组化染色分析和实时PCR测试,分析参与伤口愈合的几种关键因子:血管内皮生长因子(VEGF)、肌肉肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子(TGF-β1)表达量的变化情况。发现HA2水凝胶在早期阶段,能够增强VEGF和α-SMA分泌,但减少TGF-β1表达式,从而缓解伤口的炎症,改善皮肤再生,缓解疤痕形成。