黄曲霉菌利用花生进行繁殖的机制研究

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黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌产生的次级代谢产物,是一种超强的致癌物质,能污染花生等农作物,给人类带来经济与健康的损害。本文以抗感花生GT-C20(R)和易感花生Tifrunner(S)为研究对象,通过实验发现,黄曲霉菌对花生种子的侵染不仅仅只是停留在花生种皮的表面,而是通过营养菌丝进入了花生种子内部,并且在内部大量增殖,破坏植物细胞组织与功能,为其提供自身生长所需的营养物质。在感染48h内黄曲霉菌已经迅速透过花生种皮,进入易感花生子叶部分。利用直接滴定法、索氏提取法和茚三酮比色法分别测定花生感染黄曲霉前后不同抗性花生中总糖、还原糖、脂肪、脂肪酸、蛋白质和氨基酸的变化;利用石蜡切片与透射电镜(TEM)分别观察花生感染黄曲霉前后不同抗性花生中的形态变化;利用实时定量PCR测定黄曲霉菌中与营养利用有关的三个水解酶基因在不同抗性花生中的表达变化规律。本实验中可以看出黄曲霉对花生的侵染具有普遍性,但随着花生的营养物质不同,受到黄曲霉的侵染程度会不同,脂类和糖类是关键营养因素;而且随着黄曲霉生长的程度不同,花生消耗的营养物质也不同,脂类和糖类变化显著,尤其是脂肪和还原糖的变化量较大。在黄曲霉侵染花生时,花生中的还原糖是黄曲霉生长的主要碳源。采用实时定量PCR的方法检测了三个黄曲霉菌水解酶基因的表达状况,研究了这三个基因的在易感花生与抗感花生上的表达规律,结果发现,1-7天内三类水解酶在易感花生上的表达规律为蛋白酶基因表达量明显比脂肪酶基因的表达量要少,这一结果与花生中蛋白质含量变化规律相同。在抗感花生上的表达均存在3-4天的抑制期,而后又呈现上升趋势,这一结果充分说明抗感花生对黄曲霉菌的抗性表现为一段时间的抑制,而非彻底的抗性。本论文通过探究黄曲霉与易感、抗感花生的相互影响,了解水解酶基因与基质营养物质及细胞形态的变化,以期为抗黄曲霉菌花生抗性品种的选育提供更详实的依据。
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