【摘 要】
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研究目的眼内恶性肿瘤（Intraocular malignant tumor）可致盲、致残、甚至导致死亡,严重威胁患者生命和生存质量。经典眼内恶性肿瘤发生机制聚焦染色体异常和基因突变等遗传学研究。近来,眼肿瘤表观遗传领域的研究逐渐被重视,染色质重塑,长非编码RNA和组蛋白修饰等多种新的表观遗传修饰被发现与肿瘤发生密切相关。本研究旨在利用染色体构象捕获,陷阱重组蛋白,眼内原位移植等技术和方法,从最新
【基金项目】
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卫生部公益性行业专项项目（201402014）； 国家自然科学基金（81372909,31470757）； 高等学校博士创新科研基金（BJX201624）；
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研究目的眼内恶性肿瘤（Intraocular malignant tumor）可致盲、致残、甚至导致死亡,严重威胁患者生命和生存质量。经典眼内恶性肿瘤发生机制聚焦染色体异常和基因突变等遗传学研究。近来,眼肿瘤表观遗传领域的研究逐渐被重视,染色质重塑,长非编码RNA和组蛋白修饰等多种新的表观遗传修饰被发现与肿瘤发生密切相关。本研究旨在利用染色体构象捕获,陷阱重组蛋白,眼内原位移植等技术和方法,从最新表观遗传角度探究眼内恶性肿瘤的发生机制,并尝试利用表观遗传修饰可逆性的特点,开展靶向治疗研究,为眼内恶性肿瘤的治疗提供新靶点和理论基础。材料和方法1.通过染色体构象捕获方法探索眼内恶性肿瘤发生中形成的异常构象形态,通过DNA亲和吸附洗脱等方法解析新发现的异常构象;通过表达谱芯片筛选长非编码RNA ROR下游靶基因,并通过染色质免疫共沉淀方法明确长非编码RNA对下游靶基因的调控机制。2.通过稳转系构建,CCK8实验,划痕实验,Transwell实验,软琼脂实验等方法,检测异常空间构象和长非编码RNA靶基因等因素对眼内恶性肿瘤增殖和迁移能力的影响。3.通过巴豆酸钠,小分子抑制剂和陷阱CTCF重组蛋白等表观遗传手段,探究眼内恶性肿瘤的靶向治疗效果及其作用机制。4.通过裸鼠原位/皮下移植实验和免疫组化实验等方法,在动物体内和肿瘤组织中验证关键调控因子表达情况及肿瘤治疗效果。研究结果1.视网膜母细胞瘤的RB1启动子区存在由CTCF介导的异常构象,该异常构象能招募EZH2使RB1启动子区发生H3K27me3修饰,抑制RB1基因表达;敲除CTCF或运用小分子抑制剂GSK503能破坏该异常构象,激活RB1表达,进而抑制视网膜母细胞瘤的增殖能力。2.陷阱CTCF重组蛋白能显著抑制葡萄膜黑色素瘤的增殖和迁移能力,其作用靶点SELL是一种原癌基因,它能促进葡萄膜黑色素瘤的发生和发展。3.PRKD3是lnc RNA ROR的下游靶点,抑制PRKD3表达能显著抑制肿瘤的增殖和迁移能力,lnc RNA ROR通过去除PRKD3启动子区甲基化激活该基因表达。4.巴豆酸钠能提高组蛋白巴豆酰化修饰水平,抑制葡萄膜黑色素瘤的增殖和迁移能力,黑色素瘤中组蛋白巴豆酰化修饰水平与肿瘤发生部位及其恶性程度相关。研究结论1.视网膜母细胞瘤中,由CTCF介导的异常构象导致的抑癌基因失活是导致视网膜母细胞瘤发生的重要原因,通过干扰CTCF表达或小分子抑制剂GSK503能有效破坏异常构象,重新激活抑癌基因表达,进而抑制视网膜母细胞瘤的增殖能力。2.陷阱CTCF重组蛋白具有显著的抑制葡萄膜黑色素瘤增殖和迁移的能力,且对正常细胞影响较小,是良好的多靶点治疗药物。3.PRKD3是葡萄膜黑色素瘤中重要促癌lnc RNA ROR的下游靶点,ROR可通过去除PRKD3启动子区的H3K27三甲基化修饰激活其表达,从而促进肿瘤的增殖和迁移。4.巴豆酸钠能显著抑制葡萄膜黑色素瘤的增殖和迁移能力,且对正常细胞影响较小,是治疗葡萄膜黑色素瘤的潜在小分子化合物。
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