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目的动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心脑血管疾病及AS斑块破裂引起的急性心脑血管事件是心脑血管疾病患者致死致残的首要原因。AS主要病理学特征包括大、中动脉血管壁的慢性炎症、氧化应激和脂质积累。寻找有抗炎、抗氧化活性的内源性物质是当前研发抗AS药物的重要方向之一。吲哚-2,3-二酮,又名吲哚醌(Indole-2,3-dione,isatin,ISA),在体内广泛分布,具备抗炎、抗氧化等多种药理活性,可能是一种理想的抗AS物质。本研究拟通过在AS动物模型中单用ISA及联用经典调脂药物的方法,探讨ISA对AS和斑块稳定性作用,并尝试分析可能机制。方法1.实验动物分组及模型建立选取6-8周龄雄性载脂蛋白E敲除小鼠(Apolipoprotein E knockout mice,apoE-/-),随机分为6组:空白对照组、阳性对照组(辛伐他汀5mg/kg)、ISA低中高剂量组(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)及合并用药组(ISA50mg/kg+辛伐他汀5mg/kg),每组12-13只,均喂养高脂高胆固醇饲料(脂肪15.8%和胆固醇1.25%),每日灌胃给予溶剂(1.25%西黄蓍胶)或药物一次,灌胃12周后处死小鼠留取血液及组织样本。2.小鼠体重和一般状态评价每周末称量小鼠体重并对其一般状态(灌胃反抗能力、皮毛光泽程度及颈部肿胀程度)进行观察、记录。3.血脂含量测定给药第4周末,小鼠禁食后内眦采血50ml,分离血浆,酶学法测定血浆内总胆固醇(total cholesterol,TC)及甘油三酯(triglyceride,TG)的含量。4.脂质氧化指标测定给药第8周末,小鼠禁食后内眦采血50ml,分离血浆,采用分光光度法测定血浆中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。5.血浆炎症因子测定酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分别测定各组小鼠血浆内的主要炎症因子:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量。6.组织病理学检查分离小鼠全长主动脉,剖开并暴露内膜,修洁并弃去管周脂肪组织,行油红O染色;将主动脉根部包埋并制成冰冻切片,进行油红O染色标记AS斑块,分别计算其主动脉内膜斑块面积及主动脉根部切片斑块面积并分析。7.斑块稳定性评价通过免疫组化法测定小鼠主动脉根部斑块部位的巨噬细胞(MOMA-2抗体标记阳性区域)、平滑肌细胞(α-SM-actin抗体标记阳性区域)的含量;采用油红O染色法测定脂质含量及Masson染色法测定胶原含量。并运用公式:斑块稳定性得分=(平滑肌细胞面积+胶原面积)/(巨噬细胞面积+脂质面积)来评估AS斑块的稳定性。8.统计分析方法实验数据均采用x±s的形式表示,两组间进行比较选用独立样本t检验方法,统计结果均用GraphPad Prism6软件进行统计,图像信息均采用Image-Pro Plus 6.0软件进行分析。P<0.05说明差异有统计学意义。结果1.给药过程中各实验组较空白对照组体重无明显差别。给药末期对小鼠的一般状态进行评价,各实验组较空白对照组状态活跃(依次增加34%、34%、44%、36%和36%),表明ISA能够显著改善小鼠的一般状态。2.酶学法检测血浆中TC和TG的含量:各实验组与空白对照组相比,仅见辛伐他汀组TC含量有所降低(辛伐他汀组VS.空白对照组小23%),其他组无明显差别;TG含量无明显差别。3.分光光度法检测血浆中SOD活性及MDA含量:各实验组小鼠SOD活性和MDA含量与空白对照组相比均未见明显变化。4.ELISA法检测血浆中TNF-α和IL-6含量:ISA可明显降低apoE-/-小鼠血浆TNF-α含量(依次减少42%、23%、35%、19%和26%)和IL-6含量(ISA中剂量组vs.空白对照组小38%)。5.ISA可明显降低主动脉内膜斑块负荷(依次减少46%、42%、44%、34%和36%)及主动脉根部斑块面积(依次减少51%、35%、36%、25%和32%)。6.ISA可显著减少主动脉根部斑块部位巨噬细胞含量(依次减少72%、68%、70%、57%和50%)和脂质含量(依次减少34%、29%、36%、26%和34%),显著增加平滑肌细胞含量(依次增加160%、29%、89%、155%和87%),胶原含量无明显变化。斑块稳定性评分结果表明ISA可使斑块稳定性显著增强(依次增加3.29倍、1.09倍、2.22倍、1.81倍和1.87倍)。结论1.ISA能够减轻AS损伤,并显著改善斑块稳定性。2.ISA的抗AS活性可能与其抗炎机制有关,与血脂变化和氧化应激状态无关。