目的急性心肌梗死发生后，因血栓形成、心肌细胞炎症反应、残余心肌细胞工作负荷加重、多种体液因子发生剧烈变化等因素，致使患者心输出量急剧下降、心脏扩大等病理过程相继发生并造成严重后果。本研究采集急性心肌梗死患者外周静脉血样，通过分子生物学技术检测急性心肌梗死患者不同时间点外周静脉血单核细胞中p38蛋白的表达，初步探讨p38蛋白的表达与心梗后炎症反应的关系。方法1.病例采集：采集宁夏医科大学总医院、银川市第一人民医院心内科急性心肌梗死患者40例做为实验组（又称心梗阻），根据患者心梗时间将实验组分为四个亚组，分别为心梗后3、6、12及24小时组；同期采集健康成人20例做为健康对照组；对于入组的实验组或健康对照组成员，符合病例收集标准（见正文）并取得其同意后，抽取其外周静脉血9ml-10ml送实验室处理。2.分子生物学检测：2.1单核细胞的采集：将所采集的血样平均分装于3个离心管中，等倍生理盐水稀释。另外选用3个离心管，每个离心管各加入单核细胞分离液3ml。分别将前述稀释好的血样缓缓加入单核细胞分离液中，以血样和单核细胞分离液之间明显分层为佳。将其放入水平低温离心机中，3000rmp/min离心25分钟后取出，此时可见离心管中呈现明显分层现象。收集最上层的淡黄色血清并置入-80℃备用，同时将离心管中淡黄色血清之下的单核细胞层收集于EP管中。2.2单核细胞的裂解及总蛋白的提取：将上述所收集的含有单核细胞的EP管放入4℃离心机中，3000rmp/min离心5分钟，取出EP管，目视可见白色单核细胞沉积于EP管底部，弃上清液之后，用PBS缓冲液吹悬单核细胞后再次3000rmp/min离心5min，完成后再次弃去上清，PBS缓冲液吹悬、离心，该过程重复2-3次后可在2个EP管中得到较为纯净的单核细胞，此后为三个EP管编号为1、2、3号。向1号EP管中加入Trizol试剂裂解单核细胞后置于-80℃保存；向2、3号EP管中加入事先配置好的蛋白提取液200ul，放于4℃摇床上轻摇15分钟后置于4℃离心机中，14000rmp/min离心15分钟后收集上清，置于另外两个EP管中，-80℃保存备用。此后，每份血样中单核细胞内p38α基因的转录水平、p38蛋白的翻译水平可分别由荧光定量PCR和western blot等技术检测，血清中TNF-α的含量可由ELISA测定。结合上述数据可研究p38蛋白在急性心肌梗死患者外周血单核细胞内的表达以及其同TNF-α表达关系。结果1、荧光定量结果：心梗组中四个亚组与健康对照组相比，其p38α基因表达校对值的差异存在显著性（F=54.70，P=0.000＜0.05）；在此基础上，以健康对照组患者p38α基因表达量为1，在急性心肌梗死发生后的3、6、12、24小时后，患者外周血单核细胞中p38α基因的表达量分别是健康人的1.196倍、1.429倍、1.673倍和1.165倍；2、Western blot印迹结果：心梗组中四个亚组p38总蛋白与健康对照组p38总蛋白相比，差异无统计学意义（F=1.763，P=0.149＞0.05）；病例组中各个亚组磷酸化p38蛋白与健康对照组磷酸化p38蛋白校对值相比，差异有统计学意义（F=1857.56，P=0.000＜0.05）；病例组内各个亚组相比，差异亦有统计学意义（P=0.000＜0.05）；提示发生急性心肌梗死后，患者单核细胞中p38总蛋白未见明显变化，而磷酸化p38蛋白发生较为明显变化，其随心梗时间延长而蛋白表达量逐步增高，并于急性心肌梗死12小时后达到高峰，随后磷酸化p38蛋白含量逐步下降；3、ELISA测定血清中TNF-α浓度：心梗组中四个亚组和健康对照组患者血清中TNF-α的浓度相比，差异有统计学意义（F=360.25，P=0.000＜0.05）；四个亚组之间比较差异仍有统计学意义（P=0.000＜0.05）；提示急性心肌梗死发生后（24小时之内），患者血清中TNF-α的浓度随时间延长而逐步增高。1.结论急性心肌梗死后12小时之内，患者血液中单核细胞内p38α基因持续激活，表达量持续增加，其功能可能并非是增加p38蛋白的翻译水平，而是执行某种潜在的信号转导。2.急性心肌梗死后12小时之内，患者血液中单核细胞内总p38蛋白表达量未见明显变化，而磷酸化蛋白表达量持续增加，其功能可能在于启动其下游的相关信号分子，并在心梗后心脏功能的恶化过程中发挥极其重要的作用。3.急性心肌梗死后24小时之内，如果不做任何处理，患者血清中TNF-α的浓度将持续升高，这种变化可能是磷酸化p38蛋白及众多细胞对应激性损伤的综合作用所致