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目的探讨Wnt3a在百草枯诱导肺上皮细胞上皮-间质转化中的作用及其分子机制。方法使用百草枯(Paraquat,PQ,50 μmol/L)诱导人肺泡上皮细胞(HBE),采用Western Blot和q-PCR技术,检测上皮细胞标记物E-Cadherin、Occludin和成纤维细胞标记物α-SMA、Vimentin等蛋白的表达水平变化,验证百草枯诱导人肺泡上皮细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)模型的建立。使用Wnt3a人重组细胞因子(100μg/ml)诱导HBE,采用Western Blot和q-PCR技术,检测上皮细胞标记物E-cadherin、Occludin和成纤维细胞标记物α-SMA、Vimentin以及Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达水平,验证Wnt/β-catenin信号通路的激活。设计并构建针对Wnt3a的siRNA片段和阴性对照,转染HBE细胞,下调Wnt3a蛋白表达水平,同时采用百草枯诱导,检测E-cadherin、Occludin、α-SMA、Vimentin的表达水平,观察抑制Wnt3a蛋白表达后,对PQ致肺纤维化中肺泡上皮细胞EMT过程的作用及影响。结果1、PQ能够诱导人肺上皮细胞EMT进程,并激活Wnt/β-catenin信号通路。和对照组比较,PQ组上皮细胞标记物E-cadherin、Occludin的表达水平降低,成纤维细胞标记物α-SMA、Vimentin的表达水平显著升高,说明PQ能诱导人肺上皮细胞发生EMT。同时促进β-catenin表达水平升高,差异具有统计学意义,表明PQ引起Wnt/β-catenin信号通路激活。和对照组相比,Western Blot和q-PCR结果显示,PQ组Wnt3a表达水平明显升高。2、Wnt3a参与调控百草枯诱导HBE的EMT进程,能够激活Wnt/β-catenin信号通路。用Wnt3a人重组细胞因子处理HBE细胞,和对照组相比,处理组上皮细胞标记物E-cadherin、Occludin表达水平显著降低,而成纤维细胞标记α-SMA、Vimentin的表达水平显著升高,Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin表达水平显著上升,这说明Wnt3a能诱导HBE的EMT进程,激活Wnt/β-catenin信号通路。3、Wnt3a siRNA通过下调Wnt3a表达水平,使得PQ激活的Wnt/β-catenin信号通路被抑制,PQ诱导的EMT进程被阻断。用Wnt3a siRNA转染HBE,干扰目的基因Wnt3a的表达,同时采用百草枯(50μmol/L)处理72小时,和PQ组相比,Wnt3a-siRNA处理组的β-catenin表达水平明显降低,说明PQ激活的Wnt/β-catenin信号通路能被Wnt3asiRNA抑制。上皮细胞标记物E-cadherin、Occludin的表达水平升高,而成纤维细胞标记物α-SMA、Vimentin的表达水平降低,差异具有统计学意义,这说明靶向下调Wnt3a的表达水平,能够阻断PQ诱导的EMT进程。结论1、百草枯能够诱导人肺上皮细胞的EMT过程,并激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导Wnt3a表达水平显著升高。2、Wnt3a能激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导人肺上皮细胞发生EMT。3、siRNA下调靶基因Wnt3a的表达水平,能够抑制PQ激活的Wnt/β-catenin信号通路,同时阻断百草枯诱导HBE的上皮-间质转化过程,这表明PQ可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺纤维化的发生发展。