目的：　　幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,H.pylori)是唯一可以定植在人和动物胃粘膜的革兰阴性、呈多形性的微需氧细菌，是消化道疾病的主要致病菌，与某些消化道之外的疾病也要有一定关系，世界范围内感染率超过60％[1]。H.pylori的CagA等毒力因子是通过Cag致病岛编码的IV型分泌系统注入宿主细胞中，经过一系列的级联反应发挥其毒力作用而致病。目前关于cag致病岛基因的功能尚未完全明确，其致病机制也在研究之中。因此,本文以cag致病岛中的hp0530基因为研究对象,通过分子生物学、微生物学等技术初步探讨了hp0530基因的功能。　　方法：　　1.克隆与表达hp0530基因　　根据Genbank中H.pylori26695全基因序列，利用Primer Premier5.0设计引物，PCR扩增获得hp0530抗原性较强的基因片段，构建原核表达载体pET-28a(+)-hp0530，导入表达工程Rosetta；经IPTG诱导，SDS-PAGE电泳鉴定，Ni2+-NTA柱分离纯化；复性浓缩得到重组Hp0530融合蛋白。　　2.制备鼠源多克隆抗血清　　纯化后的Hp0530融合蛋白免疫昆明小鼠，制备抗hp0530多克隆抗血清，酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗血清效价。　　3．构建与鉴定hp0530基因缺失株　　利用基因打靶技术，设计PCR引物并扩增hp0530基因上下游同源臂片段，构建hp0530基因缺失株重组自杀质粒，即pBlueKM40-△hp0530::kan。电转化法使自杀质粒转入H.pyloriNCTC26695菌体中，利用卡那霉素抗性筛选出同源重组成功的阳性菌株，并使用PCR、酶切等技术验证后，得到H.pylori hp0530基因缺失株：△hp0530。　　4.检测△hp0530的生长繁殖状况　　（1）检测正常培养不同时间点的野生株26695和缺失株△hp0530的OD值，比较二者的生长情况。　　（2）检测将野生株26695和缺失株△hp0530与胃上皮细胞GES-1分别共同培养后的不同时间点的细胞数，比较二者的生长情况。　　5.检测hp0530蛋白的亚细胞定位　　收集并裂解与胃上皮细胞共培养的幽门螺杆菌，采用超高速离心法对其进行亚细胞分离，分离后的组分包括膜蛋白（包括内膜和外膜）、胞质蛋白以及周质间隙蛋白。利用western blot实验，以鼠抗hp0530多克隆抗血清为一抗，明确hp0530蛋白在菌体中的亚细胞定位　　6.检测与胃上皮细胞GES-1共培养后的△hp0530缺失株对CagA蛋白的转运、和宿主细胞IL-8分泌功能的影响。　　结果：　　1. PCR扩增获得hp0530的部分基因片段为510 bp，相对分子质量约为24 KD。　　2.克隆表达技术及动物实验获得了重组hp0530融合蛋白的多克隆抗血清，其效价为1:32000　　3.成功构建了hp0530基因缺陷重组自杀质粒pBlueKM40-△hp0530::kan，并获得了H.pylori hp0530基因缺陷株：△hp0530。　　4..生长曲线绘制结果显示：△hp0530缺失株的生长状况与野生株26695比较没有明显差别，对宿主细胞的侵袭亦没有明显差异，并且不影响CagA蛋白的转运，但影响宿主细胞分泌IL-8的量。　　5. Western Blot实验结果表明hp0530蛋白位于细菌膜组分，包含内外膜部分。　　结论：　　野生株26695的hp0530的较好抗原性的一段基因为510 bp，相对分子质量约为24 KD；其编码蛋白hp0530位为细菌体膜部分；hp0530基因的缺失不影响CagA蛋白的转运，但降低H.pylori诱导宿主细胞分泌IL-8的能力。