目的:用高糖和低糖培养基分别培养人肾小管上皮细胞(HK2),Transwell共培养人羊膜间充质干细胞(Human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)和高糖培养的HK2。通过观察自噬标志物的表达变化,探讨hAMSCs对高糖环境下HK2自噬的影响。方法:将细胞株HK2分为:低糖组(Low glucose,LG组,5.5mM)、高糖组(High glucose,HG 组,30mM)、hAMSCs 共培养组、雷帕霉素组(Rapamycin 组,RAPA 组)、RAPA共培养组、3-甲基腺嘌呤组(3-Methyladenine组,3-MA组)以及3-MA共培养组。CCK8检测四种不同糖浓度培养基(5.5mM、10mM、20mM、30mM)培养HK2在24h、48h以及72h的细胞活力;Western Bolt检测HK2自噬标志物(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、P62)的变化;流式细胞术和Hoechst/PI荧光染色检测HK2的凋亡率;免疫细胞荧光检测LC3B的表达;RT-PCR检测自噬标志物(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、P62)mRNA的变化;透射电子显微镜检测自噬小体的数量;CCK8检测HK2的细胞活力;安稳血糖仪检测培养基在24h、48h以及72h的葡萄糖糖含量。结果:①CCK8结果显示:HK2在HG(30mM)培养基中的细胞活力较LG(5.5mM)在24h时显著降低(P<0.05)。②Western Bolt结果HG组HK2自噬标志物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达受抑制、P62表达升高,而hAMSCs共培养逆转了三者的表达。③流式细胞术结果和Hoechst/PI荧光染色结果一致,HG组的HK2凋亡率显著升高(P<0.05),hAMSCs处理能降低凋亡率。④对HG组的HK2细胞进行自噬激活和抑制处理,再共培养后,WB检测结果显示:HG组的自噬受抑制(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达降低、P62表达升高),共培养后自噬活性升高(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达升高、P62表达降低);RAPA处理后,HK2的自噬活性较HG组升高,共培养后自噬激活尤为明显;3-MA处理后,自噬活性达到最低,hAMSCs共培养后增加了 HK2的自噬。⑤免疫荧光染色检测各组LC3B的表达结果趋势与WB结果一致。⑥RT-PCR检测各组自噬标志物(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、P62)的mRNA的表达,其结果总体趋势与WB结果一致。⑦透射电子显微镜检测各组自噬情况,LG组可见自噬小体,HG组自噬小体明显减少,共培养后较HG组数量增加;RAPA处理后,自噬小体的数量增加,hAMSCs共培养后数量增加尤为明显,3-MA组几乎观察不到自噬小体,共培养后可见少量自噬小体。⑧CCK8检测各组HK2的活力,发现细胞活力随着自噬活性成正相关。⑨安稳血糖仪检测各组培养基的葡萄糖浓度显示hAMSCs共培养能显著降低培养基葡萄糖浓度(P<0.05),降低速度随时间增加而增加。结论:HK2在HG环境下自噬受到抑制,而hAMSCs共培养后能激活HG环境下HK2受损的自噬活性。