【摘 要】
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目的:从双参中分离纯化得到均一多糖,并对均一多糖的理化性质、结构表征和抗氧化活性进行研究。方法:1、双参地下部分采用95%乙醇提取后,药渣经热水蒸煮法提取得水溶性成分为主的粗提物。粗提物分别经AB-8大孔吸附树脂柱层析去除色素和其它成分得水溶性部位,以苯酚硫酸法监测合并具有同一峰型的洗脱成分即得双参粗多糖,Sevag法除蛋白、醇沉得总多糖,总多糖分步醇沉得不同分子量双参粗多糖,冷冻干燥,经高效凝胶
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目的:从双参中分离纯化得到均一多糖,并对均一多糖的理化性质、结构表征和抗氧化活性进行研究。方法:1、双参地下部分采用95%乙醇提取后,药渣经热水蒸煮法提取得水溶性成分为主的粗提物。粗提物分别经AB-8大孔吸附树脂柱层析去除色素和其它成分得水溶性部位,以苯酚硫酸法监测合并具有同一峰型的洗脱成分即得双参粗多糖,Sevag法除蛋白、醇沉得总多糖,总多糖分步醇沉得不同分子量双参粗多糖,冷冻干燥,经高效凝胶色谱法分析得不同分子量的双参多糖TGPA、TGPB和TGPC。以对DPPH、羟自由基和超氧阴离子的清除作用作为评价指标,评价它们的体外抗氧化活性。2、将TGPB和TGPC分别经纤维素柱和凝胶色谱柱串联分离得到5个均一多糖。测其总糖、蛋白质和糠醛酸含量。对其纯度和分子量进行鉴定与分析,通过观察其溶解度、性状、颜色对其理化性质总结。利用IR、UV、PMP-HPLC、高碘酸氧化和Simth降解对TGP-(1-5)进行结构表征。3、对HMC细胞建立高糖模型。ELISA法检测均一多糖作用于模型细胞中MDA和SOD的含量。结果:1、TGPA、TGPB和TGPC对DPPH、羟自由基和超氧阴离子均有一定的消除能力,其中对羟自由基和超氧阴离子的清除作用呈浓度依赖性。2、TGP-1、TGP-2、TGP-3、TGP-4和TGP-5经HPGPC检测均为单一对称峰,证明其为均一多糖,IR结合PMP-HPLC柱前衍生化法分析。证明TGP-1为中性均一糖,而TGP-(2-5)为酸性均一多糖。PMP-HPLC柱前衍生化法表明:TGP-1由D-葡萄糖组成;TGP-2由D-半乳糖醛酸、D-半乳糖和D-阿拉伯糖,摩尔比为50.0:10.8:12.4;TGP-3和TGP-4均由D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖和D-阿拉伯糖组成,TGP-3摩尔比为2.4:41.3:4.9:15.4:12.4。TGP-4摩尔比为4.3:146.1:23.5:2.0:26.7;TGP-5由D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖,其摩尔比为54.2:4.5:7.9:12.2。高碘酸氧化和Smith降解显示:TGP-1含有葡萄糖可能含有1→3、1→3,4、1→3,6、1→2,3、1→2,4和1→2,3,4键型的存在。TGP-3、TGP-4和TGP-5水解产物含有甘油和赤藓醇,推测其中可能含有1→2,6、1→4、1→4,6和1→2等键型。3、当葡萄糖浓度为30 mmol/L,作用48 h,HMC异常增殖效果最佳。此条件作为高糖最佳模型。TGP-3和TGP-4可以抑制高糖刺激的人肾小球系膜细胞的增殖,并呈浓度依赖性。ELISA试剂盒显示TGP-3和TGP-4可以使人肾小球系膜细胞内SOD增加,使MDA含量降低。结论:1、通过对三种体系的清除作用评价继而为双参均一多糖的分离纯化、结构表征和抗氧化活性进一步研究提供了基础材料。2、研究对PMP-HPLC柱前衍生化方法学考察,结果显示该方法精密度和准确度高,重现性好,衍生化的多糖水解液在48 h内稳定性良好,此方法适合分析双参粗多糖的单糖组成。通过UV、IR、高碘酸氧化和Smith降解证明了均一多糖存在的不同连接方式的糖苷键。为进一步深入双参多糖的结构表征提供了参考依据。3、对HMC细胞模型细胞异常增殖体外细胞实验和试剂盒测定SOD以及MDA含量确定TGP-3和TGP-4可能对糖尿病肾病有保护作用。
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