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固定金属螯合亲和膜是一种有效的蛋白质分离纯化技术。本文主要研究了棉布作为亲和膜基质的可行性,采用环氧活化法对棉布进行改性,制备Cu2+-IDA金属螯合亲和膜,对其制备工艺、蛋白质吸附性能及对蛋白质的分离纯化进行了研究,结果表明棉布作为膜载体具有一定的研究价值。通过对不同棉含量的布进行比较确定了以100%纯棉布作为亲和膜的载体,它具有较好的储藏稳定性,溶剂适用范围较广,可以保存在20%乙醇、空气和去离子水中三个月,铜结合量基本不变。通过重复实验,结果表明膜具有较好的重复使用性能。通过单因素和正交试验得出最佳的活化反应和偶联反应条件。活化反应最佳条件:活化温度为30℃,NaOH浓度为2.0mol/L,活化时间为4h,振荡频率为155r/min;偶联反应最佳条件:IDA用量为1.2g,偶联温度为50℃,偶联时间为10h。用此膜介质吸附溶菌酶时,1h左右达到吸附平衡;随着温度的升高,溶菌酶吸附量增加;离子强度的影响恰好相反,在低离子强度下,吸附量大,高离子强度下,吸附量下降。最佳pH为7.0时既可达到最佳吸附量又可防止蛋白质变性。亲和膜介质对溶菌酶的等温吸附线很好的符合Langmuir形式,经曲线拟合可知最大吸附容量Qm为0.50mg/cm2亲和膜。以棉布为载体制备亲和膜柱,确定了用此柱进行蛋白质分离纯化时的上样、淋洗、吸脱速度,分别为:0.8mL/min、1.6mL/min、2.0mL/min。在此条件下,选用蛋清蛋白和乳清蛋白这两个天然多蛋白体系对以纯棉布为载体制备的固定金属螯合亲和膜的性能进行了研究,研究表明:采用此种亲和膜一步分离纯化蛋清蛋白可以得到纯度较高的溶菌酶,分离纯化乳清蛋白的效果不是特别明显,吸附的蛋白质可能是乳清蛋白中含有的微量的酪蛋白。