河南沿黄渔区气单胞菌的毒力与耐药性研究

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:yuanjian2009
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河南省黄河流域水资源丰富,是我省重要的水产养殖区域。随着水产业集约化养殖,鱼类病害频发,严重阻碍水产养殖业的可持续发展。气单胞菌(Aeromonas)属于气单胞菌科、气单胞菌属,可引起多种水产动物感染患病,出现出血、溃疡和肠炎等症状。气单胞菌的致病过程与其产生的多种毒力因子密切相关,编码这些毒力因子的基因已被广泛用于判定气单胞菌属物种的潜在致病力。抗菌药物在水产养殖动物细菌性疾病的治疗中发挥重要作用,而不科学的使用药物导致其耐药性和多重耐药现象日益严重。了解渔源气单胞菌的毒力及耐药情况,可为气单胞菌病的早期预警和寻找安全、有效的疾病防控方法奠定基础。本文检测了养殖池水中气单胞菌属细菌的季节性分布,分析了河南省沿黄渔区气单胞菌的毒力和耐药性,主要结果如下:1.养殖池塘气单胞菌的季节性分布使用16S-RFLP方法检测养殖池塘水样中气单胞菌属细菌的季节性分布,结果显示养殖池塘气单胞菌的数量随温度的变化而变化,在78月份数量达到最高(7×103 cfu/mL),在12月份数量达到最低(3×102 cfu/m L),池水中共鉴定出8种气单胞菌,分别为维氏气单胞菌(A.veronii)、温和气单胞菌(A.sobria)、豚鼠气单胞菌(A.caviae)、嗜水气单胞菌(A.hydrophila)、杀鮭气单胞菌(A.salraonicida)、中间气单胞菌(A.media)、简达气单胞菌(A.jandaei)和库蚊气单胞菌(A.culicicola),其中维氏气单胞菌为养殖池塘气单胞菌中的优势种,在春、夏、秋季分别占80%、90%、95%,而冬季维氏气单胞菌所占比例降至气单胞菌总数的64%,同时杀鲑气单胞菌数目明显上升,达冬季气单胞菌总数的22%。2.河南沿黄渔区气单胞菌的毒力PCR检测河南沿黄渔区分离的269株气单胞菌10种毒力基因act、ast、alt、aer、hly、lip、omp、fla、ela、ahpA的携带情况,结果显示被检气单胞菌至少携带1种毒力基因,气单胞菌中毒力基因aer、lip、act、fla、omp、ela的检出率分别为89%、86%、84%、79%、78%、59%,这6种毒力基因在病鱼、发病池水和未发病池水气单胞菌中的分布没有显著性差异。毒力基因ast、alt、hly、ahpA在病鱼和发病池水气单胞菌中的检出率均高于未发病池水气单胞菌中该基因的检出率。3种来源气单胞菌中,97%的气单胞菌同时具有溶血活性和蛋白酶活性。10株强毒株(LD50<106 cfu/尾)均分布于病鱼源气单胞菌中,发病池水源和未发病池水源气单胞菌均为弱毒株(LD50≥106 cfu/尾)。病鱼源不同毒力基因型气单胞菌的致病力不同,携带ast、alt、aer、hly、ahpA毒力基因的菌株,属于强毒株。3.河南沿黄渔区气单胞菌的耐药性使用K-B纸片法检测河南沿黄渔区气单胞菌对8类20种抗菌药物的敏感性,结果显示病鱼、发病池水和未发病池水源气单胞菌对青霉素G和氨苄青霉素的耐药率均为100%,对四环素、强力霉素和萘啶酸的耐药率均超过30%。所有被检气单胞菌对3种以上抗菌药物耐药的耐药率为90.4%。所有被检气单胞菌中共有耐药谱45种,其中耐药谱型PG/AMP/DOX的比例最高(12.3%)。耐药基因检测显示blaTEM的检出率最高(100%),其次是ant(3’’)-I(99%)、flor(28%)、tet E(23%)、tet A(8%)、qnrS(12%)、sul2(6%)。blaTEM和tet A耐药基因检出结果与耐药表型一致;携带耐药基因tet E、sul2、qnrS、ant(3’’)-I、flor菌株分别对四环素类、磺胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、酰胺醇类的耐药表型结果不完全一致。4.河南沿黄渔区维氏气单胞菌的ERIC分型使用ERIC-PCR对河南沿黄渔区维氏气单胞菌进行分型研究,结果显示维氏气单胞菌的ERIC分型呈现较好的多态性,每种ERIC分型中的菌株来源各不相同,强毒株与弱毒株呈现交叉分布,而且具有相同ERIC分型且具有相同的毒力基因型的维氏气单胞菌为强毒株;具有相似ERIC分型的维氏气单胞菌具有相似的耐药谱。本研究通过对河南沿黄渔区气单胞菌的毒力与耐药性的研究,将为气单胞菌引起疾病的早期预警和预防以及指导养殖生产上合理使用抗菌药物提供基础资料。
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