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几丁寡糖(N-acetyl chito oligosaccharides,NACOS)为几丁质的降解产物。相比壳聚糖降解产物壳寡糖(Chitosan oligosaccharide,COS),几丁寡糖由于乙酰基的存在,而具有与壳寡糖不同的生物活性。由于缺乏高效几丁质酶,传统几丁寡糖的制备需化学或者酶法乙酰基化壳寡糖,繁琐且效率低下而不易获取,因而相比壳寡糖,几丁寡糖的生物活性及其背后的机理很少被报道,几丁寡糖免疫调节作用和调控机制还不清楚。课题组前期获得了一个高活性的重组几丁质酶,可以降解虾壳或几丁质制备几丁寡糖,使得几丁寡糖商业化生产成为可能。本论文研究中,为弄清几丁寡糖的免疫调节作用及机制,我们使用六种单一聚合度的几丁寡糖(NACOS1-6),以及酶法制备的两种几丁寡糖混合物(低聚几丁寡糖;LNACOS和高聚几丁寡糖;HNACOS),来验证它们对巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节作用,包括免疫增强作用及抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症作用。我们旨在弄清楚不同聚合度的NACOS和COS之间的差异。结果如下:(1)NACOS对RAW264.7细胞的免疫增强作用与COS相似,所有NACOS都能显著增加活性氧(ROS)的产生、吞噬活性以及促炎细胞因子(IL-1β,IL-6和TNF-α)的产生。但是,与COS和脂多糖(LPS)不同,NACOS1和NACOS6显着抑制一氧化氮(NO)的产生。此外,Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化水平(IκBα,p65)发现NACOS显著促进该两种蛋白的磷酸化水平。这些结果表明,NACOS能够促进巨噬细胞的非特异免疫反应以及通过NF-κB信号通路促进促炎细胞因子的产生。(2)NACOS抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的炎症作用与COS相似,但不同聚合度的NACOS之间的抗炎作用存在一些差异。HNACOS、NACOS1和NACOS6能显著抑制LPS诱导巨噬细胞的NO和促炎细胞因子(IL-6和TNF-α)的产生。所有NACOS都能显著抑制LPS诱导的巨噬细胞的吞噬活性以及促炎细胞因子IL-1β的产生,尤其是HNACOS、NACOS1和NACOS6具有更强的抑制作用。关于ROS的产生,发现LNACOS,NACOS1,NACOS2和NACOS3可显着降低LPS诱导的ROS产生。Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化水平(IκBα,p65)发现NACOS显著抑制LPS诱导的IκBα和p65的磷酸化水平,尤其是NACOS6抑制效果最强。这些结果表明,NACOS能够抑制LPS诱导的巨噬细胞的非特异免疫反应以及通过NF-κB信号通路抑制促炎细胞因子的产生。综上所述,我们证实了NACOS对RAW264.7细胞的免疫调节作用与NF-κB信号通路有关。这项研究可以为不同聚合度的NACOS在人类健康中的应用提供参考。