酵母基因PHO85a编码一个依赖于细胞周期蛋白（cyclin）的蛋白激酶（Cdk），Pho85b与Pho80形成Pho85-Pho80激酶复合物，磷酸化Pho4从而调节其细胞地位。此外，Pho85还参与其他细胞功能调节，包括细胞周期、糖原代谢，以及细胞的自我吞噬作用等。Pho85的这种功能多效性归于其相关的细胞周期蛋白因子，迄今为止已经鉴定了10个与Pho85相关的细胞周期蛋白质因子（Pcl）：Pcl1/2亚家族，包括Pcl1，Pcl2，Clg1，Pcl5 ，以及Pcl9；和Pho80亚家族，包括Pho80，Pcl6，Pcl7，Pcl8，以及Pcl10。我们先前曾独立地克隆到Pcl7（PAP1），并对其功能做了初步研究。本论文的主要工作包括寻找Pcl7-Pho85作用底物，底物的磷酸化，以及Pcl7-Pho85对底物磷酸化的功能意义。利用酵母双杂交（two-hybrid）系统，以Pcl7为靶分子寻找其作用底物，从酵母cDNA文库中克隆到一个与Pcl7结合的蛋白质，Ylr190w；根据同源性分析以及公布的数据，发现另一个Pcl7结合蛋白质，Yjl084c。Pcl7与Ylr190w/Yjl084c之间的相互作用在体内通过双杂交分析或免疫共沉淀得到证实，在体外通过GST沉降的方法也被确证。Ylr190w全长491个氨基酸，在大肠杆菌中表达并纯化了GST-Ylr190w，它可以被Pcl7-Pho85磷酸化；Yjl084c全长1046个氨基酸，体外翻译获得的全长蛋白也可以被Pcl7-Pho85磷酸化；分别表达纯化Yjl084c各个片段的GST融合蛋白质，其中间部分可以被磷酸化。它们的磷酸化均受到无机磷浓度影响：高磷条件时磷酸化程度高，低磷条件时磷酸化程度低。此外，还发现Pho81与Pcl6，Pcl7，以及Pho80之间都存在不同程度的相互作用。构建Ylr190w的两个突变体，Ylr190w（T12A）和Ylr190w（S/T-A），其中当12位Thr突变成Ala后 （T12A），仍然可以被磷酸化；而突变所有7个Ser/Thr-Pro模式的Ser/Thr后，不再被磷酸化。这表明Pcl7-Pho85磷酸化保守位点为Ser/Thr-Pro模式的Ser/Thr。利用同源重组分别构建ylr190wc和yjl084c缺失株，分析各缺失株的表型：缺失YLR190w后，细胞生长变慢，复制时间变长，G2-M期比例减少，而G0-G1和S期都增加；缺失YJL084c后，未观察的明显变化。Ynl107w（YAF9）是在另一次筛库时鉴定到的Ylr190w的一个结合蛋白质，它与人类辅转录<WP=3>激活因子AF9在蛋白质序列上有类似性。Ynl107w与Ylr190w间的相互作用受到磷条件影响，而与Ylr190w（S/T-A）间的相互作用不受磷条件影响。这表明，Ylr190w的磷酸化对其与YAF9的结合起负调控作用。