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鸡白痢沙门菌（Salmonella enterica serovar Pullorum,S.Pullorum）是鸡白痢（Pullorum disease）的病原,可引起雏鸡的急性败血症,严重危害养禽业的健康发展。鸡白痢沙门菌作为兼性胞内寄生菌,在感染鸡早期主要诱导Th2型免疫应答,进而逃避宿主免疫防御,导致细菌的持续感染。明确Th2型免疫应答相关基因及其功能有助于为鸡白痢防控提供新靶点和新认识。实验室前期已证实鸡白痢沙门菌中NO相关基因的缺失会影响宿主Th1/2型免疫应答,并基于巨噬细胞产生的NO筛选到了四个候选基因,分别为prgH（编码 type Ⅲ secretion system protein PrgH）、mgtA（编码 magnesium-translocating P-type ATPase）、carB（编码 carbamoyl phosphate synthase large subunit）和deaD（编码 ATP-dependent RNA helicase DeaD）。本研究通过构建基因缺失株和回复株并进行体外感染实验和抗原递呈实验,探究prgH缺失株诱导宿主Th应答的影响。以小鼠为模型,测定PrgH蛋白免疫小鼠后诱导的免疫应答情况。以雏鸡为模型,将prgH缺失株免疫雏鸡,探究其诱导的免疫应答以及其在体内的定植情况,以期为进一步研究鸡白痢沙门菌持续感染机制和疾病防控提供新的理论依据和靶点。1.鸡白痢沙门菌prgH、mgtA、carB和deaD基因缺失株的构建及其免疫特性分析以鸡白痢沙门菌449/87为材料,利用自杀质粒pDM4介导的同源重组法分别构建了prgH、mgtA、carB和deaD基因缺失株,生长曲线结果表明四个基因的缺失不影响鸡白痢沙门菌的生长。将缺失株分别感染鸡巨噬细胞样细胞系HD11,与野生株相比,四个基因缺失株诱导巨噬细胞产生NO、ROS含量以及NOS的活性显著增加,表明四个基因与NO的合成相关。此外,细胞因子检测结果显示mgtA和prgH缺失株诱导巨噬细胞IFN-γ和IL-12p40mRNA表达水平显著高于野生株,表明mgtA和prgH缺失株能够上调Th1型免疫应答。以鸡外周血单个核细胞体外诱导的树突状细胞为抗原提呈细胞,进行抗原提呈实验。结果显示,相比于野生株,prgH缺失株能够上调CD4+T细胞中IFN-y和IL-12p40的mRNA表达水平（P＜0.05）以及IL-12p40的含量（P＜0.05）,表明prgH基因的缺失能够诱导宿主偏向Th1型免疫应答。2.鸡白痢沙门菌PrgH蛋白的原核表达及其诱导小鼠免疫应答的分析以鸡白痢沙门菌449/87的全基因组DNA为模版,克隆prgH基因,将其分别插入pColdI和pGEX-6P-1载体,并转化感受态大肠杆菌BL21,进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot鉴定表明,成功表达His-PrgH和GST-PrgH融合蛋白。将His-PrgH皮下注射免疫BALB/c小鼠,间隔14天进行加强免疫。在二免后第7和12天,以GST-PrgH为包被抗原,ELISA检测小鼠血清中的PrgH特异性抗体水平,结果显示,PrgH蛋白能够诱导高水平的IgG抗体产生,抗体滴度为819200,且IgGI抗体滴度显著高于IgG2a（IgG1/IgG2a=2.7,P＜0.05）,表明PrgH蛋白主要诱导小鼠Th2型免疫应答。3.鸡白痢沙门菌449/87ΔprgH诱导鸡体免疫应答的研究将鸡白痢沙门菌野生株449/87和缺失株449/87ΔprgH分别肌肉注射SPF雏鸡,在感染后第14、21和28天检测细菌诱导的抗体水平、细胞因子表达和细菌定植情况。以449/87全菌为包被抗原,ELISA检测血清抗体水平,结果显示,449/87ΔprgH能够诱导雏鸡产生与野生株相同高的抗体水平,表明prgH基因的缺失不影响细菌诱导抗体的产生;qRT-PCR检测脾脏细胞因子mRNA表达水平结果显示,449/87ΔprgH感染组IFN-γ mRNA表达水平显著高于野生株组（P＜0.001）,表明449/87ΔprgH能够诱导雏鸡产生Th1型免疫应答。同时,BrdU ELISA方法检测脾脏T淋巴细胞增殖结果显示,感染第28天,449/87ΔprgH感染组脾脏T淋巴细胞增殖能力是野生株的2.8倍（P＜0.001）,表明449/87ΔprgH可以增强T淋巴细胞的活化。此外,涂板计数法分析细菌定植结果表明,449/87ΔprgH在脾脏和肝脏中的清除速率高于野生株。以上结果表明,449/87ΔprgH能够诱导雏鸡产生良好的Th1型免疫应答以清除体内细菌,为疫苗的研发提供了新的思路和靶点。