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TOP—03是第二军医大学药学院药物化学教研室全合成的高喜树碱衍生物之一，药理实验表明该化合物具有明显的抗肿瘤活性。本研究主要目的在于对其临床前药代动力学做整体的评价。本文建立了灵敏、可靠的LC—MS/MS方法，能够满足药物临床前药代动力学研究中的技术要求，同时测定了血浆、尿液、粪便、胆汁等多种生物样品中TOP—03及其活性代谢产物10—羟基—7—甲基—高喜树碱(TOP—01)的浓度，初步明确了该药物及其活性代谢产物的体内处置过程，为进一步开展临床研究及制剂研究等提供参考依据。
一、生物样品中TOP—03定量分析方法的建立及确证
本文对TOP—03和TOP—01建立了快速灵敏的LC—MS/MS生物样品定量分析方法。血浆样品经过简单的蛋白沉淀处理；尿液和胆汁样品经过流动相的稀释后高速离心；粪便样品经过流动相的萃取处理。色谱部分分析柱型号为Ultimate C8，5μm，50×4．6mm；流动相组成为90％乙腈(0．1％甲酸)：水=90：10，采用等梯度洗脱方式，流速0．30mL/min，进样量20μL。采用ESI负离子检测模式、MRM工作方式进行质谱分析。按照《化学药物非临床研究技术指导原则》的基本要求进行完整的方法学考查，所有生物样品测定的专属性、线性、准确度、精密度、回收率、基质效应、稀释效应、稳定性等均满足生物样品的定量分析要求。该测定方法成功应用于Beagle犬和SD大鼠的血浆样品测定及尿液、粪便和胆汁中的排泄研究。
二、TOP—03在Beagle犬体内的药代动力学研究
本试验设计Beagle犬单剂量静脉注射给药TOP—03注射液1．5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg三个剂量组进行药代动力学研究。采用LC—MS/MS方法分别测定了三个剂量组Beagle犬体内不同时间点血浆样品中TOP—03和TOP—01的浓度。经非房室模型法估算药代动力学参数。结果表明，Beagle犬单剂量静注给药TOP—03三个剂量组(1．5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg)后，TOP—03的药代动力学药时曲线末端相消除半衰期(t1/2)分别为1．47±0．30h、1．68±0．11h、1．26±0．16h； AUC0～∞分别为2．32±1．49μg·h/mL、3．10±0．52μg·h/mL和3．64±0．64μg·h/mL；主要活性代谢产物TOP—01的消除半衰期(t1/2)分别为2．20±1．55h、3．91±1．38h、3．86±0．72h，AUC0～∞分别为0．224±0．09μg·h/mL、1．04±0．17μg·h/mL和2．374±0．31μg·h/mL。原型药物和主要活性代谢产物TOP—01的AUC与给药剂量基本成正相关关系，相关系数R2分别为0．9181和0．9970。
三、TOP—03在SD大鼠体内的药代动力学研究
本试验设计SD大鼠单剂量尾静脉注射给药TOP—03注射液5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg三个剂量组进行药代动力学研究。采用LC—MS/MS方法分别测定了三个剂量组给药后SD大鼠不同时间点血浆样品中TOP—03和TOP—01的浓度。经非房室模型法估算药代动力学参数。结果表明，SD大鼠单剂量静注给药TOP—03三个剂量组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)后，TOP—03的药代动力学药时曲线末端相消除半衰期(t1/2)分别为3．434±0．84h、1．38±0．29h、1．194±0．15h；AUC0～∞分别为1．694±0．18μg·h/mL、3．97±0．47μg·h/mL和7．45±0．30μg·h/mL；主要活性代谢产物TOP—01的消除半衰期(t1/2)分别为3．34±5．06h、3．14±1．70h、2．74±0．62h，AUC0～∞分别为0．204±0．05μg·h/mL、1．21±0．44μg·h/mL和2．70±0．17μg·h/mL。原型药物和主要活性代谢产物TOP—01的AUC与给药剂量成正相关关系，相关系数R2分别为0．9951和0．9936。
SD大鼠单剂量尾静脉注射给药TOP—03(10mg/kg)后，于给药后收集尿液、粪便(0～72h)及胆汁(0～12h)，采用LC—MS/MS测定方法分别测定了给药后各动物不同时间段内三种生物样品中TOP—03和TOP—01的浓度。结果表明，72h内TOP—03及活性代谢产物TOP—01在SD大鼠体内经尿液累积排泄率分别为0．12％、1．40％，粪便累积排泄率分别为0．18％、1．68％。12h内胆汁累积排泄率分别为0．09％、1．82％。由以上结果我们初步推断TOP—03主要是代谢消除，具体的代谢产物有待进一步研究。