【摘 要】
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产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)属于黄单胞科(Xanthomonadaceae)、溶杆菌属(Lysobacter)。OH11是本实验室从辣椒根际土壤中分离出的一种生防细菌,该细菌基因组DNA的G+C%
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产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)属于黄单胞科(Xanthomonadaceae)、溶杆菌属(Lysobacter)。OH11是本实验室从辣椒根际土壤中分离出的一种生防细菌,该细菌基因组DNA的G+C%含量高、无鞭毛、有滑行能力,能产生多种次生代谢抗菌物质,如几丁质酶、蛋白酶、纤维素酶、β-1,3-葡聚糖酶以及热稳定性抗真菌因子HSAF。多胺是一类低分子量脂肪族含氮物,拥有两个或多个胺基,在动植物、真菌和细菌中均存在,常见的有腐胺(putrescine)、精胺(spermine)和亚精胺(spermidine)。然而,本实验室利用生物信息学分析发现,一种编码亚精胺的生物合成酶基因speD,它与细菌体内全局性调控因子Clp具有邻近的位置关系,进一步的实验分析发现speD-clp的这种临近位置关系广泛存在于各种细菌基因组中,如铜绿假单胞菌和黄单胞菌中,这表明SpeD与Clp可能是联系在一起共同发挥调控功能的。本研究中,经HPLC等试验证实SpeD是一种产酶溶杆菌OH11中催化亚精胺合成的活性酶。遗传互补和体外添加实验表明,在AspeD添加亚精胺能够恢复HSAF的产量、细菌蹭行能力以及拮抗病原真菌的活性,这一调控功能与Aclp是相似的,这表明speD是HSAF生物合成所必需的,这在SpeD的酶活和它的调控效应方面建立起一种重要的联系。而且,Western Blot实验表明,在翻译水平上,SpeD能够稳定Clp的蛋白表达量,而在转录水平上对clp基因的表达量却没有影响。更重要的是,通过细菌双杂交及体内体外实验后,发现与亚精胺不同的是,SpeD能直接与它的临近转录因子Clp互作。本研究首次发现一种多胺合成酶SpeD能够与细菌中一个转录因子Clp互作,这种独特的互作方式在细菌中还未被报道过。而且,外源添加亚精胺能够稳定Clp的蛋白表达量,添加亚精胺抑制剂DCHA能够抵消这一影响,这表明SpeD-Clp蛋白能够协同调控HSAF的生物合成,这为后续的科研工作者提供了新的认知。
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