【摘 要】
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铅等重金属污染对环境和人类生存造成的威胁已经引起了政府和各界人士的广泛关组,建立一种快速、灵敏的原位检测方法迫在眉睫。本文的目的是通过绿色荧光蛋白标记的方法,构建
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铅等重金属污染对环境和人类生存造成的威胁已经引起了政府和各界人士的广泛关组,建立一种快速、灵敏的原位检测方法迫在眉睫。本文的目的是通过绿色荧光蛋白标记的方法,构建一种微生物传感器,对Pb2+的含量进行实时原位检测。首先利用抗性筛选法获得了一株对高浓度(2000mg/L)Pb2+具有抵抗能力的菌株,命名为FP2000,经鉴定为克雷伯氏菌,最适的条件是：温度37-40℃,pH值5-7。利用分子生物学手段获得了这株菌的抗铅基因和启动子序列,将启动子序列zntR与EGFP融合,获得了重组菌：BL21-pK-zntR-EGFP。该菌可以经过Pb2+离子的诱导,表达出EGFP蛋白,发出荧光。通过交叉试验考察了菌悬液浓度,孵育时间等因素对其检测结果的影响,最终获得了检测Pb2+的标准曲线的回归方程为y=1.150.96429x-690.85714,R=0.99459,线性范围为1nM-10μM。利用这种菌作为传感器与便携式荧光酶标仪结合,可以快速(20min)、高效(96样品同时进行检测)的对环境中的Pb2+污染物进行原位实时检测和监测。
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