【摘 要】
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目的:1.建立小鼠成纤维细胞系NIH-3T3应激适应细胞模型,为应激适应研究提供平行可比的实验对象.2.建立HSP90稳定高表达细胞系,探讨HSP90在应激适应中作用及机制.3.建立双向电
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目的:1.建立小鼠成纤维细胞系NIH-3T3应激适应细胞模型,为应激适应研究提供平行可比的实验对象.2.建立HSP90稳定高表达细胞系,探讨HSP90在应激适应中作用及机制.3.建立双向电泳技术平台,初步分析应激与适应对蛋白质合成的影响,筛选应激适应相关蛋白.结论:1.通过对NIH-3T3细胞进行预热处理,通过观测细胞膜损伤、DNA损伤、细胞形态变化情况,确定应激保护的时间点,建立了细胞应激适应模型,初步确认HSP90在该模型中的保护作用.2.通过转染人类HSP90 β基因可获得HSP90稳定表达细胞株.HSP90高表达导致HSP90蛋白细胞内分布改变,应激反应性增强,与部分底物蛋白的结合性改变.提示细胞可通过HSP90分子伴侣功能,抗衡应激反应中蛋白质变性引起的细胞损伤.3.双向电泳分析结果提示,细胞在紧急应激状态,可能会倾向于选择性地合成能够迅速翻译的小分子量蛋白质,应对应激损伤.预适应可通过提高细胞内保护性蛋白的贮备量,在再次应激时发挥保护作用.中间丝vimentin,起始因子eIF-4AI,Eno1蛋白差异表达,提示细胞骨架、蛋白质合成、糖代谢通路在应激适应中的重要作用.
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