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灵芝属真菌属于多孔菌目(Polyporales),灵芝科(Ganodermataceae),主要分布在中国、朝鲜半岛和日本,国内分布于福建、海南、安徽、山东、浙江、江西、湖南、广东等地。含有多糖、三萜、甾体类、核苷类、生物碱、氨基酸及微量元素化合物等成分。其中,起主要作用的是多糖和三萜类化合物。具有抗肿瘤作用,保肝护肝作用,抗氧化、抗衰老作用,心脏保护作用,改善记忆作用,抗病毒、抑制细菌作用等。本文运用多种色谱技术和波谱技术,对茶病灵芝,树灵芝和无柄紫灵芝进行了系统的化学成分研究,并对其粗提物及单体成分进行了药理活性筛选。从茶病灵芝Ganoderma theacolum乙醇提取物的氯仿部分和乙酸乙酯部分共分离得到48个化合物,包括36个三萜,3个甾体,5个生物碱,1个混源萜类,3个其它类化合物。结构鉴定为:灵芝酸XL1(ganodericacidXL1,1*),灵芝酸 XL2(ganoderic acid XL2,2*),20-羟基-灵芝酸 AM1(20-hydroxy-ganoderic acid AM1,3*),灵芝烯酸 AM1(ganoderenicacidAM1,4*),ganoderesinC(5*),灵芝酸 XL3(ganoderic acid XL3,6*),灵芝酸 XL4(ganoderic acid XL4,7*),灵芝酸XL5(ganoderic acid XL5,8*),灵芝酸 XL6(ganoderic acid XL6,9*),赤芝酮 A(lucidoneA,10),赤芝酮 B(lucidoneB,11),赤芝酮 C(lucidoneC,12),赤芝酮 D(lucidoneD,13),赤芝酮 F(lucidoneF,14),灵芝酸 B 甲酯(methylganoderate B,15),灵芝烯酸 H(ganoderenicacidH,16),灵芝酸 C2(ganodericacidC2,17),灵芝酸 C2 甲酯(methylganoderateC2,18),灵芝酸 AP3(ganodericacidAP3,19),灵芝酸C2乙酯(ethylganoderateC2,20*),3β，155α-二羟基-11-羰基-5α-羊毛甾-8,24-二烯-26-酸(3β,15α-dihydroxy-11-oxo-5α-lanosta-8,24-dien-26-oicacid,21),3β,7β-二羟基-11,15,23-三酮-羊毛甾-8,16-二烯-26-酸(3β,7β-diydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oicacid,22),3ββ,7β-二羟基-11,15,23-三酮-羊毛甾-8,16-二烯-26-酸甲酯(3β,7β-dihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid methyl ester,23),灵芝赤芝酸 B(ganolucidic acid B,24),ganolucidate F(25),灵芝烯酸B(ganoderenicacidB,26),灵芝烯酸 B 甲酯(ganoderenicacidBmethyl ester,27*),灵芝酸 ζ(ganoderic acid ζ，28),7-羰基-灵芝酸 Z(7-oxo-ganoderic acidZ,29),7-羰基-灵芝酸 Z2(7-oxo-ganodericacidZ2,30),灵芝酸 Y(ganoderic acid Y,31),7-羰基-灵芝酸 Z3(7-oxo-ganoderic acid Z3,32),polycarpol(33),ganodermadiol(34),3β3,21-dihydroxy-lanost-7,9(11),24-trien-26-oic acid(35),ganoderon B(36),3β,5α,6β-trihydroxy-ergosta-7,22-diene(37),ergosta-7,22-dien-2β,3α,9α-triol(38),ergosterol D(39),(E)-p-acetoxy coumaryl alcohol(40),protocatechuic acid(41),iso vanillic acid(42),spirolingzhine D(43),2-oxo-1,2-dihydroquinoline-6-carboxylic acid(44),1-oxo-1,2-dihydroisoquinoline-3-carboxylic acid(45),尿嘧啶(uracil,46),sinensine(47),维生素 B2(vitamin B2,48)。其中,化合物1-9,20,27为新化合物(带*的化合物),已知化合物均为首次从茶病灵芝子实体中分离得到。从树灵芝Ganodermasessile乙醇提取物的氯仿部分和乙酸乙酯部分共分离得到45个化合物,包括25个三萜,10个甾体,4个生物碱,2个混源萜类化合物,4个其它类化合物。结构鉴定为:灵芝酸LM2(ganodericacidLM2,49),灵芝孢子酸A(ganosporeric acid A,50),灵芝酸J(ganoderie acid J,51),灵芝酸C((ganoderic acid C1,52),灵芝酸 A(ganoderic acid A,53),灵芝酸 B(ganoderic acid B,54),灵芝酸M(ganoderic acid M,55),灵芝酸C6(ganoderic acid C6,56),灵芝酸 AM1(ganodericacidAM1,57),灵芝酸 G(ganodericacidG,58),灵芝酸I(ganoderic acid I,59),灵芝赤芝酸 A(ganolucidic acid A,60),灵芝酸 ε(ganoderic acidε,61),灵芝酸H(ganodericacidH,62),灵芝酸 E(ganoderic acidE,63),灵芝酸 D2(ganoderic acid D2,64),灵芝酸 TR(ganoderic acid TR,65),赤芝酸 A(lucidenic acid A,66),赤芝酸 C(lucidenic acid C,67),赤芝酸 C 甲酯(methyl lucidenate C,68),赤芝酸 LM1(lucidenic acid LM1,69),赤芝D(lucidone D,70),灵芝烯酸A(ganoderenie acid A,71),灵芝烯酸C(ganodenic acid C,72),灵芝烯酸 D(ganoderenicacidD,73),麦角甾-7,22-二烯-2β,4α-二醇(ergosta-7,22-dien-2β,4α-diol,74),星鱼甾醇(ergosta-7,22-dien-3β-ol,75),ergosta-7,22-dien-3-one(76),3 β,5α,6β-trihydroxy-ergosta-7,22-diene(77),3 β,5α,9α-trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one(78),ergosterolD(79),麦角甾醇(ergosterol,80),过氧麦角甾醇(5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol,81),ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β,9α-tetraol(82),β-谷甾醇(β-sitosterol,83),尿嘧啶(uracil,84),维生素 B3(vitamin B3,85),ribitol(86),4-hydroxybenzeneacetic acid(87),mannitol(88),histidine(89),spirolingzhineD ethyl ester(90*),hepatacosanoic acid(91),维生素 B2(vitamin B2,92),spirolingzhineD(93)。其中,化合物90为新化合物,已知化合物均为首次从树灵芝子实体中分离得到。从无柄紫灵芝Ganodderma mastoporum乙醇提取物的氯仿部分共分离鉴定了9个化合物,包括8个三萜和1个生物碱。结构鉴定为:灵芝酸E(ganoderic acidE,94),灵.芝灵酸H(ganoderic acid H,95),灵烯G(ganoderenic acid G,96),灵芝烯酸 K(ganoderenic acid K,97),7α,15α-二羟基-3,11,23-三羰基-5α-羊毛甾-8-烯-26-酸(7α,15α-dihydroxy-3,11,23-trioxo-5α-lanosta-8-en-26-oic acid,98),3β-hydroxy-12β-acetoxy-7,l 1,15,23-tetraoxo-lanost-8,20(22)-dien-26-oic acid(99),7β,15α-dihydroxy-4,4,14-trimethyl-3,l 1-dioxochol-8-en-24-oic acid(100),3β,7β-dihydroxy-11,12,15,23-tetraoxo-lanost-8-en-26-oic acid(101),对氨基苯甲酸甲酯(4-aminobenzoic acid methyl ester,102)。化合物 94-102 均为首次从无柄紫灵芝子实体中分离得到。活性筛选结果显示:1.保肝活性:采用MTT法观察茶病灵芝粗提物,茶病灵芝单体化合物和树灵芝单体化合物对人肝细胞HL-7702细胞成活率的影响。结果显示茶病灵芝95%乙醇提取物50%乙醇大孔树脂洗脱部分在10-5M时表现出一定的保肝活性,新化合物1,4和5在10-5M时表现出一定的保肝活性;同时,化合物11和26在10-5M时也表现出一定的保肝活性。树灵芝单体化合物50,53,54,59,63和64在10-5M时也表现出一定的保肝活性。2.细胞毒活性:采用MTT法测定了茶病灵芝部分化合物对五种人癌细胞的抑制作用。结果显示样品浓度10-6 M时,化合物30对癌细胞H460表现出一定的细胞毒活性;化合物31对癌细胞H460,BGC823和HCT116表现出一定的细胞毒活性。3.多囊肾抑制作用方面,在MDCK囊泡模型中,化合物2,6和7能够抑制囊泡的形成和增大。其中化合物2和7能够显著抑制囊泡的增大,化合物6有抑制作用但仅仅在第12天有统计学意义,并且没有化合物2和7的抑制作用显著;浓度均为12.5 μ时化合物2,6和7不影响MDCK细胞的细胞生存率;浓度均为12.5 μM时化合物2,6和7不影响总细胞集落数;化合物7能够显著抑制MDCK囊的形成。对Ras/MAPK信号通路的作用结果显示:化合物7在不同浓度时(3.125,12.5和50μM)均能够显著降低H-Ras蛋白,B-raf蛋白,p-]MEK蛋白,p-ERK蛋白,Egr-1蛋白和c-fos蛋白的表达水平,Raf-1蛋白的表达水平呈剂量依赖的关系。4.抑制蛋白酪氨酸激酶活性:采用MTT法观察茶病灵芝粗提物和部分单体化合物对蛋白酪氨酸激酶的抑制活性,结果显示茶病灵芝95%乙醇提取物50%乙醇大孔树脂洗脱部分在10-5M时表现出一定的蛋白酪氨酸激酶的抑制活性(抑制率为78.11%),各化合物均无明显的蛋白酪氨酸激酶抑制活性(IC50>10μmol·L/1)。本论文从三种灵芝中共分得102个化合物(其中有6个为茶病灵芝和树灵芝共有,有2个为树灵芝和无柄紫灵芝共有)。从茶病灵芝乙醇提取物中共分离鉴定了 48个化合物,从树灵芝乙醇提取物中共分离鉴定了 45个化合物,从无柄紫灵芝乙醇提取物中共分离鉴定了 9个化合物。其中,茶病灵芝95%乙醇提取物50%乙醇大孔树脂洗脱部分在10-5M时表现出一定的保肝活性和蛋白酪氨酸激酶抑制活性;化合物 1,4,5,11,26,50,53,54,59,63 和 64 在 10-5M时表现出一定的保肝活性;样品浓度10-6 M时,化合物30对癌细胞H460表现出一定的细胞毒活性,化合物31对癌细胞H460,BGC823和HCT116表现出一定的细胞毒活性;在MDCK囊泡模型中,化合物2,6和7能够抑制囊泡的形成和增大。