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第一章中,我们以量子点作为荧光标记物,建立了一种基于全内反射的超灵敏的DNA单分子检测方法。在实验中,首先是捕捉DNA利用其修饰的氨基与硅烷基化基底上的环氧基结合,使捕捉DNA固定在基底上,接着用乙醇胺和BSA将基底上未与捕捉DNA结合的位点封闭,然后利用DNA的杂交反应,使目标DNA与捕捉DNA结合,最后将结合了检测DNA的量子点通过与目标DNA的杂交反应固定在基底上。这样在基底上就形成了含有量子点(QD)荧光探针的夹心复合物。利用高灵敏的CCD捕获基底上量子点的荧光信号,通过统计图片中荧光亮点的个数绘制个数-浓度工作曲线对目标DNA进行定量,检测限为：1×10-14 mol/L。实验中需要注意的几个关键因素：荧光图像的获得,荧光探针的选择,基底的制备,溶液及硅烷化基底上背景噪音的消除,量子点的非特异性吸附和结合,都在本文中作了详细的讨论。我们用这种超灵敏的检测方法检测了细胞中信使RNA(mRNA)的含量,在检测mRNA的含量时,以细胞中的mRNA为模板,在反转录酶的催化下,转录为RNA-DNA双链复合物,复合物中与mRNA互补的单链叫做互补DNA(cDNA),然后利用核糖核酸分解酶将复合物RNA-DNA中的mRNA水解掉。利用全内反射单分子计数法对cDNA进行定量,从而间接对mRNA进行定量。第二章中,我们以羧基化的量子点作为荧光标记物,建立了一种超灵敏的杂交富集全内反射荧光显微术单分子计数测定DNA的方法。这种方法可使检测限低至8×10-18 mol/L。在实验中,首先是将氨基修饰的捕捉DNA利用氨基与硅烷基化基底上的环氧基结合,固定在基底上,接着用乙醇胺和BSA将基底上未与捕捉DNA结合的位点封闭,然后利用DNA的杂交反应,将1mL的目标DNA溶液富集到基底上,最后,将结合了量子点的检测DNA与基底上富集了的目标DNA结合。这样在基底上就形成了含有量子点荧光探针的夹心复合物。用单分子全内反射荧光显微镜获得玻璃片基底上QD的图像并统计对应于单个目标DNA分子的QD数,通过QD数定量tDNA。