牙周致病菌Aa-LPS对组织特异性单核/巨噬细胞细胞因子表达的影响

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目的探讨牙周致病菌伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对不同血脂状态下不同的组织器官来源的兔单核/巨噬细胞诱导的细胞因子表达的影响,以及外源性IL-10作用后的相应的变化,为研究牙周炎与全身疾病间可能共同的免疫机制提供相关佐证,并为预防和治疗牙周炎相关的系统性疾病提供思路。方法1、高脂饮食饲养建立新西兰兔高脂模型;2、建立同一个体(正常血脂及高脂血症新西兰兔)不同组织来源单核/巨噬细胞与牙周致病菌Aa-LPS、大肠杆菌E.coli-LPS以及外源性IL-10的共同培养的细胞模型;3、通过Real-time PCR及ELISA分别检测牙周致病菌Aa-LPS和E.coli-LPS以及外源性IL-10共同作用后,细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8mRNA及蛋白表达情况的变化。结果1、高脂饲养6周后,高脂饮食组血脂含量明显高于正常水平(P<0.05),高脂建模成功。2、Real-time PCR及ELISA检测结果表明:(1)正常血脂新西兰兔各部位单核/巨噬细胞在1μg/ml E.coli-LPS及Aa-LPS诱导下各细胞因子在mRNA水平及蛋白水平均明显高于空白对照组(P<0.05),且Aa-LPS的诱导作用较E.coli-LPS强(P<0.05)。(2)正常血脂新西兰兔不同部位的单核/巨噬细胞对Aa-LPS的反应存在部位差异性(P<0.05)。总体上,强弱顺序依次为AM>Mo>KC>PM。(3)高脂血症兔各部位单核/巨噬细胞在基线水平表达的细胞因子在mRNA水平及蛋白水平均普遍高于血脂正常的兔(P<0.05)。(4)不同部位单核/巨噬细胞在高脂血症影响下对Aa-LPS的反应不全相同:Mo及PM在高脂血症影响下,受Aa-LPS刺激产生的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8总体上高于血脂正常状态(P<0.05),而AM及KC受高脂血症影响,在Aa-LPS刺激下各炎症因子表达呈下降趋势(P<0.05)。(5)以100ng/ml外源性IL-10预处理Aa-LPS刺激的正常及高脂血症兔不同部位单核/巨噬细胞,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达总体呈下调趋势(P<0.05)。结论1、牙周致病菌Aa-LPS具有强致炎性,能够诱导不同部位单核/巨噬细胞细胞因子的表达。2、不同部位单核/巨噬细胞对Aa-LPS的刺激存在敏感性的差异。3、高脂血症状态下伴随着TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达。4、不同部位单核/巨噬细胞在高脂血症状态影响下对Aa-LPS的反应存在差异性。5、IL-10能拮抗Aa-LPS诱导不同部位单核/巨噬细胞细胞因子的表达。
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