【摘 要】
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目的:观察hsa-let-7e-5p通过调控ESPL1对结肠癌细胞增殖、侵袭和凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:采用TCGA数据库来分析hsa-let-7e-5p在结肠癌细胞和正常结肠细胞间表达水平的差异;并采用RT-PCR来观察hsa-let-7e-5p在结肠癌细胞系（SW480、HCT-116、HT-29）以及正常结肠细胞系（NCM460）中表达水平的差异;将hsa-let-7e-5p-mi
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目的:观察hsa-let-7e-5p通过调控ESPL1对结肠癌细胞增殖、侵袭和凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:采用TCGA数据库来分析hsa-let-7e-5p在结肠癌细胞和正常结肠细胞间表达水平的差异;并采用RT-PCR来观察hsa-let-7e-5p在结肠癌细胞系（SW480、HCT-116、HT-29）以及正常结肠细胞系（NCM460）中表达水平的差异;将hsa-let-7e-5p-mimcis转染至结肠癌细胞系内并检测转染后hsa-let-7e-5p的表达水平,采用CCK8、Transwel和流式细胞术实验检测过表达hsa-let-7e-5p结肠癌细胞系的增殖、侵袭和凋亡水平;采用Targetscan预测hsa-let-7e-5p与ESPL1的靶向关系;以TCGA数据库分析ESPL1在结肠癌细胞和正常结肠细胞间表达水平的差异;并以WB和RT-PCR实验分析ESPL1在结肠癌细胞系与正常结肠细胞系间蛋白和m RNA表达水平的差异;通过双荧光素酶报告分析hsa-let-7e-5p对ESPL1的靶向关系;以WB和RT-PCR实验观察hsa-let-7e-5p的表达水平对ESPL1在蛋白和m RNA表达水平上的影响;将外源性的ESPL1转入过表达hsa-let-7e-5p的结肠癌细胞系内并检测hsa-let-7e-5p的表达水平,采用CCK8试验、Transwel和流式细胞术实验观察转入外源性的ESPL1对过表达hsa-let-7e-5p的结肠癌细胞系增殖、侵袭和凋亡的影响。结果:TCGA数据库分析显示,与正常结肠细胞相比,结肠癌细胞中hsa-let-7e-5p低表达;RT-PCR显示,与正常结肠细胞系相比,结肠癌细胞系中hsa-let-7e-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）,其中SW480细胞系中hsa-let-7e-5p的表达水平最低（P＜0.01）;与阴性对照组相比,转染hsa-let-7e-5p-mimcis的SW480细胞系中hsa-let-7e-5p的表达量显著升高（P＜0.01）,CCK8实验显示hsa-let-7e-5p可显著抑制SW480细胞系的增殖能力（P＜0.01）,Transwell实验显示hsa-let-7e-5p可显著抑制SW480细胞系的侵袭能力（P＜0.01）,流式细胞术凋亡实验显示hsa-let-7e-5p可显著促进SW480细胞系的凋亡（P＜0.01）;Targetscan预测显示hsa-let-7e-5p与ESPL1存在碱基互补配对的靶向关系;TCGA数据库分析显示与正常结肠细胞相比,结肠癌细胞中ESPL1高表达;WB和RT-PCR实验显示,与NCM460细胞系相比SW480细胞系中ESPL1的蛋白和m RNA表达水平显著升高（P＜0.001）,（P＜0.01）;双荧光素酶报告提示,hsa-let-7e-5p在转录后水平直接靶向ESPL1（P＜0.01）;WB和RT-PCR显示,过表达hsa-let-7e-5p的SW480细胞系中ESPL1的蛋白和m RNA表达水平均下降（P＜0.01）;与对照组相比,转入外源性ESPL1的过表达hsa-let-7e-5p的SW480细胞系中hsa-let-7e-5p的表达水平显著降低（P＜0.01）,CCK8试验、Transwell和流式细胞凋亡实验显示,转入外源ESPL1可挽救hsa-let-7e-5p对SW480细胞系的增殖和侵袭能力的抑制,并挽救其对凋亡的促进（P＜0.01）。结论:hsa-let-7e-5p在结肠癌细胞中低表达,ESPL1在结肠癌细胞中高表达。hsa-let-7e-5p对ESPL1具有负向靶向调控作用,并且hsa-let-7e-5p通过负向调控ESPL1的表达水平进而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进细胞凋亡。提示hsa-let-7e-5p通过靶向ESPL1从而在结肠癌中发挥抑癌作用。
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