背景与目的食管癌（Esophageal cancinoma，EC）是常见的威胁人类生命健康的消化系统恶性肿瘤之一。食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）是主要病变发生在食管鳞状上皮组织的食管恶性肿瘤，在中国约95%以上的食管癌病例为食管鳞状细胞癌。目前而言，食管癌发病率、死亡率均较高。全世界每年新发病例人数约为40万例，每年约有30万人死于该病；中国属于食管癌高发地区，发病率约为13/10万，死亡率约为15万/年。研究表明，早期食管癌患者若能及时、有效诊疗，其治疗后5年生存率可达到90%以上；由于食管癌的发生发展过程呈逐渐演变性，早期症状并不明显，加之早期筛查诊断等方面的缺失，入院首诊多为中晚期病例，治疗后5年生存率低于10%。目前针对食管癌的治疗主要以手术、放疗、化疗以及生物治疗等传统肿瘤治疗方法为主，虽然近年来伴随食管癌诊断和治疗技术的发展，患者的生存率和生活质量都有相应的提高，但总体治疗效果仍不理想。因而现阶段食管癌的研究主要集中在如何早期发现食管癌、寻找更有效的治疗方式、提升治愈率及提高患者治疗后生存质量。食管鳞状细胞癌作为实体恶性肿瘤之一，也存在多步骤和多基因突变的发生、发展过程，同样也与肿瘤的生长代谢与生长分数、自身程序性死亡等因素均存在关联。未折叠蛋白反应（unfolded protein response, UPR）作为内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）其中重要的一种类型，其可能与肿瘤发生、发展、转移及预后密切相关。实体肿瘤细胞生长过程中因其失控性生长和增殖消耗大量的营养和氧气，加之血供不足等原因，普遍存在着微环境缺氧、营养匮乏、PH改变等情况，在这种不良的环境影响下，可致组织细胞内Ca2+平衡紊乱、内质网中蛋白质合成错误折叠堆积，从而引发内质网应激（ERS）的发生。未折叠蛋白反应（UPR）作为ERS中重要分支，是一种在进化上高度保守的细胞反应机制，通过抑制蛋白翻译，诱导ERS内伴侣蛋白分子合成，增强蛋白折叠能力，促进蛋白外输和未折叠蛋白降解，以恢复ERS稳态。这提升了肿瘤细胞生长过程中在有害因素下的生存能力，也可能是使肿瘤细胞恶性度提高并增加迁徙率的重要机制，同时持续或过度的UPR可导致肿瘤细胞的凋亡死亡。目前已知，未折叠蛋白反应（UPR）在哺乳动物体内存在着3条激活传道通路：双链RNA激活的蛋白激酶样内质网激酶(PKR like ERkinase, PERK)信号转导通路；需肌醇酶1(type-1endoplasmic reticulumtransmembrane protein kinase, IRE1)信号转导通路；活化转录因子6(activating transcription factor6，ATF6)信号转导通路。并由复杂的相关作用因子共同参与完成，其信号分子主要有GRP78、IREI、ATF6、XBP1和PERK等。GRP78(glucose regulated protein of78)为UPR最重要的伴侣蛋白和调控、转录因子，UPR过程中其转录水平明显上升，可被认为UPR激活的标志分子；ATF6(activating transcription factor6)是UPR过程中转导应激信号的重要内质网膜蛋白，其活化直接导致UPR中ATF6通路下游元件转录激活，其激活情况可被用于明确UPR中ATF6通路激活情况；XBP1（X box-bindingpro tein1）是UPR靶基因的激活因子，在UPR的IRE1信号转导通路中，IREI（inositol requiring I）对其特异性的剪切，将非剪接型XBP1-u转化为剪接型XBP1-s，从而提高其活性和引发下游效应，因而非剪接型XBP1-u与剪接型XBP1-s的表达差异决定了UPR中IRE1通路激活情况。目前已有相关研究证实，UPR在许多实体肿瘤，如乳腺癌、胃癌、肝癌、胆管癌、前列腺癌等中被激活，但ESCC组织中激活情况及其作用机制的研究并不完善。肿瘤细胞UPR在内的ERS，作为潜在的药物作用靶点已经普遍受到人们的重视，伴随着ERS学说研究的不断深入及完善，有望使我们更加充分了解实体肿瘤发生发展的分子机制，从而提供新的实体肿瘤治疗靶点及预防途径。本实验分别采用免疫组化SP及逆转录聚合酶链反应（Reverse TranscriptasePCR, RT-PCR）法检测ESCC组织中GRP78、ATF6及RT-PCR及XPB1的表达，并分析其在ESCC组织及正常食管组织中表达的差异及其与患者临床病理特征之间的关系，探讨ESCC组织中UPR存在情况及其与肿瘤发生、发展及预后关系的意义。为食管癌的诊断及治疗提供新的思路。对象与方法1.收集郑州大学第二附属医院胸外科2011年11月至2013年9月间经手术切除且经病理证实的原发性ESCC组织及距癌组织5cm以上的手术远端切缘正常食管黏膜组织各99例，所有病例术前未经放、化疗治疗。其中男性62例，女性37例；年龄38～73岁，≤60岁27例，＞60岁72例。分化程度：低分化32例，中分化53例，高分化14例；淋巴结转移情况：存在淋巴结转移30例，不存在淋巴结转移69例。2.应用免疫组化SP的方法检测99例食管鳞状细胞癌组织及其相应正常食管组织中GRP78和ATF6两种蛋白的表达情况；应用RT-PCR方法分析XBP1两种不同的亚型（非剪接型XBP1-u，剪接型XBP1-s）在食管鳞状细胞癌组织及其相应正常食管组织中表达分布情况；并分别分析GRP78、ATF6、XBP1-u、XBP1-s的表达水平与临床病理特征的关系。3.采用统计软件SPSS17.0对数据进行统计学分析，两组定性资料之间的比较采用χ2检验法进行，GRP78及ATF6蛋白在ESCC组织和正常食管组织中表达情况对比采用配对χ2检验；在ESCC组织不同病理特征因素中表达情况使用独立样本χ2检验进行；两组定量资料之间的比较采用t检验法进行，XBP1-u及XBP1-smRNA在ESCC组织和正常食管组织中相对表达量采用配对t检验；XBP1-smRNA在ESCC组织中表达情况采用独立样本t检验。检验水准α=0.05。结果1. GRP78在99例ESCC组织阳性表达高于正常食管组织，二者分别为67/99（67.7%），37/99（37.4%），差异有显著统计学意义（P＜0.001）。2. GRP78在高、中、低分化组的表达递增，分别为6/14（42.9%），35/53（66%），26/32（81.3%），三者差异存在统计学意义（P<0.05）；在存在淋巴结转移组的表达高于不存在淋巴结转移组，分别为26/30（86.7%），41/69（59.4%）差异有统计学意义（P<0.05）。GRP78表达与性别、年龄无关（P＞0.05）。3. ATF6在99例ESCC组织阳性表达高于正常食管组织，分别为62/99（62.6%），35/99（35.6%），差异有显著统计学意义（P＜0.001）。4. ATF6在高、中、低分化组的表达递增，分别为5/14（35.7%），32/53（60.4%），25/32（78.1%），三者差异存在统计学意义（P<0.05）；在存在淋巴结转移组的表达高于不存在淋巴结转移组，分别为25/30（83.3%），37/69（53.6%）差异有统计学意义（P<0.05）。ATF6表达与性别、年龄无关（P＞0.05）。5. XBP1-s mRNA在ESCC组织中表达高于正常食管组织，分别为0.446±0.033，0.217±0.018，二者存在统计学差异（P＜0.05）；6. XBP1-s mRNA在中、高分化组的表达低于低分化组，分别为0.437±0.035，0.450±0.041，两者差异存在统计学意义（P<0.05）；在存在淋巴结转移组的表达高于不存在淋巴结转移组，分别为0.448±0.040，0.436±0.032，差异有统计学意义（P<0.05）；。XBP1-s mRNA表达与性别、年龄等因素无关（P＞0.05）；7. XBP1-u mRNA在ESCC组织及正常食管组织中表达分别为0.191±0.016，0.188±0.013，二者无统计学差异（P＞0.05）；8. XBP1-u mRNA表达与性别、年龄、高低分化、是否存在淋巴结转移等临床病理特征因素无统计学相关，均（P＞0.05）。结论1. GRP78、ATF6、XBP1‐s mRNA在食管鳞状细胞癌组织中高表达以及XBP1‐u mRNA在两种组织中表达无差异，结果提示未折叠蛋白反应在食管鳞状细胞癌组织中存在激活情况；未折叠蛋白反应中ATF6信号通路开放参与食管鳞癌的发生；未折叠蛋白反应中IRE1信号转导通路开放参与食管鳞癌的发生；未折叠蛋白反应与食管鳞癌的发生存在关联。2.食管鳞状细胞癌组织中GRP78、ATF6、XBP1‐s mRNA的表达情况与患者性别、年龄因素不存在相关性；与食管鳞状细胞癌的分化程度、淋巴结转移临床因素存在相关性，结果提示未折叠蛋白反应参与食管鳞状细胞癌的发展，在食管鳞癌组织中未折叠蛋白反应激活与肿瘤恶性度及侵袭性正相关关系。