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登革热是由登革病毒引起的蚊媒病毒病，每年全世界登革热患者达一亿。目前对于该病尚缺乏安全有效的疫苗。登革病毒是单股正链RNA病毒，基因组全长约11Kb，含有单一开放读码框架。登革病毒膜蛋白前体prM和包膜蛋白E及非结构蛋白NS1均含有多种抗原表位，因此这些特异的病毒蛋白为登革新型疫苗的主要靶标。 DNA疫苗可以刺激动物产生体液免疫和细胞免疫。但是通常DNA疫苗的免疫原性较弱。将多种DNA疫苗混合后共同免疫将提供针对多种抗原表位的免疫应答，并有可能提高疫苗的免疫原性。本研究采用RT-PCR法获得了登革3型病毒的prME和NS1基因片段，分别将其插入真核表达载体pcDNA6／V5·His-B，C，构建了两个真核表达重组质粒。将构建的重组质粒DNA分别转染真核细胞后用免疫荧光法可检测到外源蛋白的表达。然后将两种重组质粒DNA以混合及单独形式分别免疫BALB／C小鼠，免疫的小鼠可产生中和抗体和特异性CTL。在末次免疫后第33天，双质粒重组DNA组与prME重组质粒DNA组的中和抗体水平均可达到1：32。在术次免疫后第41天，当效靶比为40：1时，双质粒重组DNA免疫组的特异性CTL杀伤率为15％，而两个单质粒DNA组分别为10.9％和12.4％。这些结果表明，配伍组重组质粒DNA可同时诱发小鼠体液免疫和细胞免疫，而且产生的细胞免疫应答具有一定的增强效果。 在进一步对所构建的登革3型病毒prME和NS1基因重组质粒DNA及其混合质粒DNA的免疫保护作用进行评价中，由于无合适的小鼠模型，本研究通过采用观察免疫小鼠血清中中和抗体水平的变化进行评估。将不同的重组质粒DNA免疫小鼠后用登革3型病毒进行攻击，分别检测中和抗体的产生情况。在病毒攻击前3天，prME和NS1基因双质粒DNA免疫组与prME基因重组质粒DNA免疫组的中和抗体滴度均为1：4。在攻击病毒后第4和8天，摘要双质粒DNA组的中和抗体滴度分别为1:8和1:4。在攻毒后第15和22天，双质粒DNA组中和抗体上升到1:8和1:16。说明双质粒DNA组诱发的中和抗体在攻毒后可再次升高。而单一的PrME重组质粒DNA组在攻毒后第4天中和抗体水平从攻毒前的1:4上升到1:32。说明单一的PrME重组质粒DNA可在攻毒后使小鼠诱生中和抗体的能力大幅提高。 由于登革3型病毒的PrME基因编码结构蛋白，其重组质粒 DNA免疫小鼠可诱导产生中可抗体，而非结构蛋白NSI基因的重组质粒DNA主要诱导产生细胞免疫。上述结果表明，PrME和NSI双质粒DNA免疫组诱导小鼠产生中和抗体的水平与单一PrME重组质粒DNA的基本一致，而其诱导小鼠产生的细胞免疫反应略高于两个单一重组质粒DNA诱导产生的细胞免疫。本研究为进一步深入探讨登革新型DNA疫苗提供依据。