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目的:单核-巨噬细胞在动脉粥样硬化进展中具有重要作用。单核细胞离开骨髓进入血液后被募集到损伤部位,分化为成熟的巨噬细胞。动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞有多种亚型,各种亚型在AS病变进展中发挥着不同的作用。养心氏是由多种中药组成的复方制剂,能从多靶点干扰动脉粥样硬化进程,发挥治疗冠心病的效能,但其抗动脉粥样硬化的机制尚不清楚,本研究以人单核细胞株THP-1细胞为基础,研究养心氏对巨噬细胞炎性活化和表型改变的影响,为阐明养心氏抗动脉粥样硬化的作用机制提供理论依据。方法:培养人THP-1细胞,用160nmol/L佛波酯(PMA)刺激,使其转化为巨噬细胞。分别以不同浓度和不同时间ox-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞,收集培养物的上清液,用ELISA法测定上清液中MCP-1、MIF的表达,用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD16及CD68的表达情况。用不同浓度的养心氏预处理THP-1源性巨噬细胞,再用ox-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞,用ELISA法检测细胞上清液MIF、MCP-1的浓度,流式细胞术检测巨噬细胞表面CD16及CD68的表达情况。结果:1.ox-LDL对THP-1源性巨噬细胞炎性活化和表型改变的影响(1)以不同浓度 ox-LDL(Omg/L、10mg/L、25mg/L 和 50mg/L)刺激 THP-1 源性巨噬细胞24小时,收集细胞上清液,用ELISA法测定上清液中MCP-1、MIF的表达,结果发现ox-LDL能以剂量依赖的方式诱导人THP-1源性巨噬细胞表达MIF和MCP-1。对照组(MIF:4.61±0.40ng/L,MCP-1:5.71±1.94pg/L),10mg/L 组(MIF:5.74 ± 0.38ng/L,MCP-1:10.66±3.13pg/L),25mg/L 组(MIF:7.09±0.41ng/L,MCP-1:20.08±1.57pg/L),50mg/L 组表达最高(MIF:18.67±0.15ng/L,MCP-1:29.30±1.48pg/L)。MIF:各组间比较均有显著性差异(p<0.01)。MCP-1:各组间比较均有显著性差异(p<0.01)。(2)以50mg/Lox-LDL分别刺激THP-1源性巨噬细胞Oh、8h、16h和24h,收集细胞上清液,用ELISA法测定上清液中MCP-1、MIF的表达,发现ox-LDL能以时间依赖的方式诱导人THP-1源性巨噬细胞表达MIF和MCP-1。对照组(MIF:4.36±0.29ng/L,MCP-1:4.27±1.03pg/L),8h 组(MIF:6.83±0.22ng/L,MCP-1:9.13±2.04pg/),16h组(MIF:7.02±0.45ng/L,MCP-1:14.37±4.08pg/L),24h组表达最高(MIF:18.72±0.09ng/L,MCP=1:24.47±3.28pg/L)。MIF:8h组和16h组之间无显著性差异(p>0.05),其余各组间均有显著性差异(p<0.01)。MCP-1:对照组和8h无显著差异(p>0.05),8h组和16h组之间无显著差异(p>0.05),其余各组间均有显著性差异(p<0.01)。(3)用不同浓度 ox-LDL(0mg/L、10mg/L、25mg/L 和 50mg/L)刺激 THP-1 源性巨噬细胞24h,利用流式细胞术测定细胞表面CD16和CD68的表达,结果发现低浓度ox-LDLL刺激对THP-1源性巨噬细胞表面CD68和CD16的表达有轻度上调,平均荧光强度结果如下:Omg/L 组(CD16:29.8,CD68:25.2),10mg/1 组(CD16:30.9,CD68:28.3),随着刺激浓度的增加,CD16和CD68的表达下调,ox-LDL 25mg/l组(CD16:29.9,CD68:23.7),以 50mg/L 下降最为明显,(CD16:26.9,CD68:22.3)。2.养心氏对THP-1源性巨噬细胞炎性活化和表型改变的影响(1)用不同浓度养心氏(0 μ g/ml、10 μ g/ml、50μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml)预处理人THP-1巨噬细胞12h后加入50mg/L ox-LDL刺激24h,收集细胞上清液,用ELISA法测定上清液中MCP-1、MIF的表达。结果发现养心氏以浓度依赖方式抑制活化的巨噬细胞表达MIF和MCP1。对照组(MIF:18.65±0.15ng/L,MCP-1:33.30±2.37pg/L),10 μ g/ml组(MIF:15.50±0.27ng/L,MCP-1:26.78±1.48pg/L),50μ g/ml 组(MIF:9.07 ± 0.26ng/L,MCP-1:26.78±1.48pg/L),100 μ g/ml 组(MIF:4.85±0.12ng/L,MCP-1:9.95±2.09pg/L),200 μ g/ml 组(MIF:4.58 ±0.36ng/L,MCP-1:8.53 ± 1.37pg/L)。MIF:100 μ g/ml 与 200 μ g/ml 组之间无显著性差异(p>0.05)。其余各组间比较,均有显著性差异(p<0.01)。MCP-1:10 μg/ml与50 μ g/ml组之间没有显著性差异(p>0.05),100 μ g/ml与200 μ g/ml组之间无显著差异(p>0.05)。其余各组间比较,均有显著差异(p<0.01)。(2)用不同浓度养心氏(10 μ g/ml、50 μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml)预处理人THP-1巨噬细胞12h后加入50mg/L ox-LDL刺激24h,利用流式细胞术测定CD16及CD68的表达,结果表明养心氏在以浓度依赖方式上调CD16及CD68的表达,平均荧光强度如下:10 μ g/ml 组(CD16:71.2,CD68:54.7),50 μ g/ml 组(CD16:92.7,CD68:60.7),100 μ g/ml 组表达最高(CD16:96,CD68:91.6),随着浓度的升高,CD16 和 CD68 的表达有所下降,200 μ g/ml 组(CD16:80.6,CD68:72.1)。结论:养心氏可能通过抑制巨噬细胞炎性活化,抑制巨噬细胞向促炎表型转化而抑制动脉粥样硬化的形成和发展。