猪流感是由猪流感病毒引起的急性、热性、传染性和群发性的高度接触性呼吸道传染病。临床上,能诱发肺气肿,肺水肿,肺纤维化等病理变化;同时,猪流感有感染人类的潜在危害,具有重要的公共卫生学意义。肺纤维化是以成纤维细胞增殖,同时大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM)聚集并伴有炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期改变。纤连蛋白1(Fibronetin1,FN1)是细胞外基质的重要组成部分,同时也是肺纤维化的关键蛋白。MicroRNAs(miRNAs)是一类短小的内源性非编码RNA,具有调控mRNA翻译作用。miRNAs调控涉及多个生命进程,如胚胎发育,肿瘤,感染免疫等。研究表明:感染猪流感病毒的小鼠肺脏中,有多个miRNA异常表达。这些miRNAs靶向多个信号通路,影响机体免疫与炎症反应;或直接靶向流感病毒基因,抑制流感病毒复制。本实验组前期工作深度测序致病性流感病毒感染的小鼠肺脏miRNAs,发现miR-206-3p显著下调,通过生物学软件预测FN1可能是miR-206-3p的靶基因。本试验通过双荧光素酶报告基因方法,验证FN1是否为miR-206-3p的靶基因。建立感染H1N1猪流感病毒小鼠模型,应用qRT-PCR相对定量法检测攻毒12 h,24 h,48 h后的小鼠肺脏中miR-206-3p和FN1的表达情况。用Western-blot检测攻毒12 h,24 h,48 h以及72 h小鼠肺脏FN1蛋白水平的表达情况。最后,分别构建含有野生型FN1 3’UTR片段以及突变的3’UTR的双荧光素酶报告质粒,转染293T细胞,通过检测野生型与突变型的荧光信号验证miR-206-3p是否能与FN1的预测位点发生作用。qRT-PCR检测结果表明,小鼠感染H1N1猪流感病毒12 h后,肺脏miR-206-3p下调明显,随着感染发展(24h,48h),miR-206-3p的表达量逐渐恢复;而FN1转录水平在感染过程中无明显变化;但FN1蛋白水平在H1N1猪流感病毒感染24 h后明显上调,48 h达高峰,72 h后出现下调。双荧光素酶报告系统结果显示,含野生型片段的质粒与含突变型片段质粒的荧光信号强度无明显差异。此结果提示:FN1可能不是miR-206-3p的靶基因,其蛋白水平的上调与miR-206-3p无直接关系,推测机体存在其他调节方式影响FN1蛋白水平。