【摘 要】
：
本论文选取从厦门集美红树林的泥土样品中分离得到的一株产琼胶酶的海洋细菌AG1作为研究对象,从中克隆到一个琼胶酶基因。对该琼胶酶基因进行了一系列生物信息学分析,并将该基因在大肠杆菌中异源表达,得到了重组琼胶酶。研究了该重组琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,并通过定点突变提高了该重组琼胶酶的热稳定性,主要结论如下:16S rRNA基因序列分析显示AG1属于产微球茎菌属（Microbulbifer
论文部分内容阅读
本论文选取从厦门集美红树林的泥土样品中分离得到的一株产琼胶酶的海洋细菌AG1作为研究对象,从中克隆到一个琼胶酶基因。对该琼胶酶基因进行了一系列生物信息学分析,并将该基因在大肠杆菌中异源表达,得到了重组琼胶酶。研究了该重组琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,并通过定点突变提高了该重组琼胶酶的热稳定性,主要结论如下:16S rRNA基因序列分析显示AG1属于产微球茎菌属（Microbulbifer sp.）,命名为Microbulbifer sp.AG1。以菌株AG1的基因组为模板,使用琼胶酶引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p MD18-T载体后进行测序。结果显示,克隆基因的大小为1302 bp,预测其所编码的蛋白质中有433个氨基酸残基。对该蛋白质进行相似性比对分析,预测该蛋白为属于GH16家族的琼胶酶。采用同源模建法构建了Microbulbifer sp.AG1琼胶酶的3D模型,富含β-折叠,整体结构由两个反向平行的β-片层组成,呈β-果冻卷状。通过定点突变分析,Microbulbifer sp.AG1琼胶酶的催化位点可能是147位和152位的谷氨酸。将不含信号肽片段的琼胶酶基因在E.coli BL21（DE3）中异源表达并纯化得到了75.6k Da的重组蛋白。该重组琼胶酶能够特异性地水解琼脂,可降解对硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷,而不降解对硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷,说明该重组琼胶酶是一种β-琼胶酶。使用琼脂糖作为底物,该重组琼胶酶的最适温度和p H值分别为60°C和7.5,重组琼胶酶在50°C和60°C下温育1 h后仍能分别保持67%和19%的残余酶活。重组琼胶酶对于除SDS和盐酸胍以外的抑制剂、去垢剂和尿素变性剂有着较好的抗性。Ba2+、Mn2+、Ni2+、Co2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+、Al3+和Fe3+对重组琼胶酶活性有不同程度的抑制作用,K+和Ca2+对重组琼胶酶活性没有明显的影响。该酶使用琼脂糖作为底物的动力学参数Km、Vmax、kcat和kcat/Km分别为3.8 mg/m L、91.7 U/mg、3468.2635 s-1和913.143 s-1mg-1m L。利用薄层色谱法和MALDI-TOF-MS质谱法分析表明重组琼胶酶的主要水解产物为新琼四糖,且不同聚合度的酶解产物均具有抗氧化活性。采用定点突变的方法构建Microbulbifer sp.AG1重组β-琼胶酶的单点突变体D136N,突变体D136N的最适反应温度和p H值与野生型相同,但是其在60°C温育1 h后仍能保持约85%的残余酶活,与野生型相比具有较好的热稳定性。微观结构分析显示,与野生型琼胶酶相比,突变后136位的氨基酸残基与周围残基的氢键数增加1个。增加的氢键对突变体D136N热稳定性的提高可能有重要作用。
其他文献
随着我国基建行业快速发展,工程总承包业务需求也大大提升,在竞争激烈的市场环境下,提高工程总承包业务竞争力成为了关键,而科学的项目成本管理不但可以实现项目成本控制和项目的盈利,更可以提升企业工程总承包业务的竞争力。本文首先介绍了工程项目管理以及项目成本管理的定义、特点,详细阐述了工程项目成本管理各个阶段的主要任务,工程项目成本管理就是对工程建设整个价值流所进行的管理控制活动,是将成本控制延伸到工程建
＜正＞对科学内容的教育不能等同于对科学知识的教育，幼儿阶段进行科学的知识教育确实过早并且不能产生应有的效果，然而对科学内容的教育可以包含对认识世界的方法的教育以及如何实现对世界的认识的教育，而这些内容在幼儿的基础性能力的教育领域当中均是必须的组成部分。对幼儿而言，接受教育的过程不可能以教育者讲解受教育者主动吸收并接受进行，而应当以幼儿更能够接受的活动组织为主要推进形式。而在活动推进的过程中如何避免
羽毛球是一项技能主导类隔网对抗性运动项目,其特点主要是快、准、狠、活等,此项目对羽毛球运动员的体能有较高的要求。运动员需要在场上做急停、急转、启动、腾空、挥拍等一系列动作,这对运动员的速度、力量、灵敏、耐力、协调、稳定及柔韧等多种体能要素都提出很高的要求,面对如此激烈的竞赛和高强度、大负荷的训练,这就决定了羽毛球运动员须具备良好的身体素质才能更好的发挥出较高竞技水平。功能性训练是一种加强神经肌肉工
目的 通过观察电针对慢性脑低灌注（chronic cerebral hypoperfusion,CCH）大鼠脑血流量、认知功能、肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）主要成分和内皮功能的影响,探讨RAS在老龄易发CCH中的病理作用及电针调节RAS改善脑循环的可能机制。方法 正常SPF级雄性SD大鼠（18-22月龄）75只随机分为假手术组（OS组）、模型组（
生活水平提升的同时,各种类型的财产增值保值的消费行为也逐渐增多。金融行业的快速发展以及消费者主权意识提高的同时,金融消费者逐渐意识到了自身在与金融机构之间进行交易时所扮演的角色,更加重视自身权益的保护以及权益受损时的救济。知情权是消费者权利保护的基础,对于金融消费者也不例外,知情权是金融消费者获取其他权利的前提与保障。知情权的保障在一定程度上促使金融消费者更加积极的行驶自己的权利,在权益保护中发挥
从古至今,我国一直是一个农业大国,农业与我们日常生活密不可分。从我国加入世贸组织以来,农业的生产和经营都取得了阶段性的进展。如今,我国市场化和城镇化的脚步逐渐加快,与此同时农业的现代化发展也迫在眉睫。农业上市公司作为贯穿在“小农户”与“大市场”之间的纽带,是我国农业升级、改造和壮大的优势力量。目前来看,虽然我国政府对于农业上市公司实施了较多优惠政策,但由于农业行业与其他行业相比更易受到自然条件影响
我国经济经过三十年的高速增长,一批又一批的本土优秀企业借助中国经济的腾飞逐步走出了国门走向国际舞台。但是,部分企业由于认知的局限普遍缺乏责任意识,在经济利益的诱惑面前无视市场竞争规则、环境可持续发展理念,企业违规行为层出不穷,诸如“瑞幸咖啡事件”、“北青旅黑导游”、“獐子岛扇贝”等等,为我国企业的健康发展蒙上了阴影。因此,企业社会责任也逐渐成为学术界和社会民众所关注的焦点,责任意识的觉醒同时伴随着
近年来,中国经济蓬勃发展,建筑施工行业作为我国支柱型行业之一,总体发展趋势良好。但由于投资规模大、生产流动性强、项目周期长等行业特点,再加上近年来行业竞争激烈、原材料价格上涨、人工成本增加、去杠杆背景下银行筹资政策紧缩等因素影响,财务风险方面的问题激增,财务风险管理更加复杂和困难。因此对建筑施工企业财务风险管理进行研究,具有一定的理论和现实意义。本文选取施工企业SJ建筑公司作为案例,重点研究案例公
汽油汽车核心的部件是发动机,为汽车行驶提供动力。曲轴作为发动机动力核心零件,在承受由气缸发生、连杆传导激振力的同时将其输出为转矩,驱动发动机其他相关零件进行工作。曲轴的材料对发动机的使用性能和寿命有直接影响,所以在发动机设计中,需要保证曲轴在汽车发动机的全生命周期内不允许有裂纹等质量问题发生。同时,在保证制造质量情况下,如何从设计上节省成本,也是设计过程需要考虑的目标。使用球墨铸铁曲轴代替合金钢曲
非负矩阵的组合理论是自上世纪50年代以来兴起并发展迅速的一个数学分支,它研究那些仅依赖于矩阵的零位模式,而与元素本身的数值无关的性质。它不仅在基础数学研究中具有极其重要的地位,在其它的学科中也有重要的应用,如在信息科学、通信网络、计算机科学、编码和密码学、物理、化学、生物、社会学、经济数学等许多方面有具体的应用背景。 本原矩阵的本原指数及广义本原指数是非负矩阵组合理论的重要研究内容,到目