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白细胞介素1是一种重要的细胞因子，具有广泛的生物学活性。它通过与胞膜上的白细胞介素1受体Ⅰ型结合，启动其生物信号的传导。白细胞介素1参与多种病理变化过程。降低白细胞介素1的作用已成为一种治疗这些疾病的方法。白细胞介素1受体Ⅰ型经蛋白酶切割后，其胞外部分即形成可溶性的白细胞介素1受体Ⅰ型(sIL-1RI)。sIL-1RI能与IL-1结合，作为一种IL-1RI的拮抗剂用于一些疾病的治疗，也可作为靶点用于IL-1RI拮抗剂的筛选。本工作是以链霉菌为表达系统，克隆并表达人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型。 pSGL1是本实验室从S．globisporus中分离到的一新质粒。为了将该质粒发展成有用的克隆载体，本工作首先测定了该质粒的最小复制子核苷酸序列，经检索是一个新的序列，并且确定了其属于滚环复制类型的质粒；然后以S．globisportis总DNA为模板，采用PCR方法扩增得到含有C1027前蛋白信号肽gpp及其调控序列的DNA片段；将其插入pSGL1的衍生质粒pSGLN，构建了新的链霉菌-大肠杆菌穿梭质粒载体pSGLgpp。 从HepG2细胞中提取总RNA，采用RT-PCR方法扩增得到人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型(sIL-1RI)的cDNA，经序列测定表明结果正确。sIL-1RI cDNA与酪蛋白酶melC1信号肽序列的片段融合后，将该融合基因克隆至链霉菌载体pIJ702；同时将sIL-1RIcDNA克隆至我们自行构建的新型链霉菌-大肠杆菌穿梭质粒载体pSGLgpp信号肽gpp下游。Southern杂交证明所得到的两个重组质粒中插入了sIL-1RI cDNA的片段。 为了观察gpp和melC1信号肽调控序列启动sIL-1RI的分泌表达，将获得的重组菌株分别在酪蛋白发酵培养基中发酵到72hr，于24hr，48hr和72hr取样。发酵液经SDS-PAGE和Western blot证实分泌表达了sIL-1RI，经蛋白印迹受体配基结合反应证实分泌表达的sIL-1RI具有配基受体结合的生物学活性。结果表明sIL-1RI的表达于72hr胞外达到最高表达量。信号肽gpp和melC1均能启动分泌表达sIL-1RI，但是在前者的调控序列启动下sIL-1RI的表达水平似高于后者。