[目 的]SIRT1蛋白平衡失调与胃癌的发生发展密切相关,但其如何发挥作用仍不清楚。本研究主要研究目的是通过硝普钠（SNP）诱导高浓度NO环境模型,验证SIRT1蛋白是否发生巯基亚硝基化修饰,并探讨SIRT1蛋白的巯基亚硝基化修饰后与胃癌发展关系的相关机制,以期为胃癌治疗提供新的调控靶点。[方法]1.在体外形细胞培养后,以人正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照,使用实时荧光定量PCR技术检测人胃癌SGC7901、BGC823、MGC803细胞株中的NOS2 mRNA表达水平,筛选出NOS2低表达的MGC803细胞株作为研究对象。2.体外构建SIRT1蛋白S-亚硝基化模型。使用MTT法筛选出SNP诱导NO高表达的最佳时间和浓度,设计实验分组,分别为DMEM完全培养基培养24h组、0.5mM SNP 处理 24h 组、0.5mM SNP 预处理 2h 后联合 100μM Carboxy-PTIO（C-PTIO）处理24h组。通过Griess试剂法测定SNP诱导后MGC803细胞的NO浓度,Biotin-switch法检测以上实验分组处理后SIRT1巯基亚硝基化水平。3.采用Transwell、划痕、克隆实验检测SIRT1 S-亚硝基化状态对MGC803细胞的侵袭、迁移、克隆能力的改变并进行细胞形态学观察。4.ELISA法测定SIRT1蛋白S-亚硝基化后NOS2和SIRT1活性,RT-PCR法测定SIRT1蛋白S-亚硝基化后NOS2相对表达量,Western blot法检测SIRT1蛋白上下游相关蛋白乙酰化野生型P53、乙酰化NF-κB、NOS2表达的变化。[结 果]1.qPCR 结果表明,MGC803、BGC823、SGC7901 人胃癌细胞株 NOS2mRNA表达量均高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,差异均有统计学意义（P＜0.05）。2.采用NO供体SNP处理胃癌MGC803细胞,MTT结果表明当SNP浓度大于0.5mM时,对癌细胞增殖具有抑制作用,随着SNP浓度的加大和时间的延长,细胞抑制作用越显著。3.Griess试剂法测定给予SNP 24h后,NO含量随SNP浓度增加而增加。4.在0.5mM SNP处理的MGC803细胞24h后,SIRT1巯基亚硝基化水平明显增加。给予NO清除剂C-PTIO同时处理后,SIRT1 S-亚硝基化水平较SNP单独处理组低。5.ELISA法检测SNP作用24h后,SIRT1活性随SNP浓度增加而降低,NOS2活性随SNP浓度增加而增加。当同时给予NO清除剂C-PTIO处理后,NOS2活性较单纯SNP处理组降低,SIRT1活性增高。6.qPCR结果显示,SNP处理24h后,随着SNP浓度增加NOS2表达逐渐增高。7.MGC803细胞经0.5μMSNP处理后,细胞侵袭能力,克隆形成率,迁移能力降低,在同时给予100μM C-PTIO处理后,细胞侵袭能力,克隆形成率,迁移能力较单纯SNP处理组增加,差异有统计学意义。8.经Western blot检测,SNP处理MGC803细胞后,乙酰化NF-κB、乙酰化野生型P53、NOS2蛋白表达量均增高,在同时给予C-PTIO处理后,与单独给予SNP处理组比较,乙酰化NF-κB蛋白、乙酰化P53、NOS2蛋白表达均下调。[结 论]1.在胃癌MGC803细胞中,SNP诱导产生的NO可以促进SIRT1蛋白发生S-亚硝基化修饰（SNO-SIRT1）,导致SIRT1活性降低。2.SNO-SIRT1表达上调可导致胃癌MGC803细胞迁移能力及侵袭能力降低,克隆形成率下降。3.SIRT1发生S-亚硝基化后,活性降低,去乙酰化作用减弱,使下游分子野生型P53乙酰化表达增强,从而发挥抑癌作用。