哺乳动物RF酰胺相关肽-3（RFamide-related peptide-3,RFRP-3）可抑制下丘脑Gn RH神经元的活性,进而抑制垂体前叶合成与分泌促性腺激素,并可通过旁分泌或自分泌方式直接参与调控雌性动物卵巢生长及卵泡发育。目前的研究主要集中在颗粒细胞和相关激素分泌与调控等,尚无RFRP-3对猪卵母细胞作用及其机制的研究。本实验以商品猪的卵母细胞为实验对象,首先确定卵母细胞中RFRP-3的表达,观察体外添加RFRP-3重组蛋白对卵母细胞成熟率和卵丘扩展的影响;其次检测体外添加RFRP-3对调控卵母细胞成熟相关因子的影响;最后检测RFRP-3是否通过WNT/β-catenin通路对卵母细胞成熟发挥调控作用,初步探讨RFRP-3对卵母细胞成熟的影响及作用机制。研究结果如下:1.应用PCR扩增卵母细胞中RFRP-3基因片段,结果表明猪卵母细胞中有RFRP-3基因表达;在培养基中添加不同浓度的RFRP-3(10-6mol/L、10-8mol/L、10-10mol/L、10-12mol/L),分析其对卵丘卵母细胞复合体（Cumulus oocyte complexes,COCs）体外成熟的影响,结果表明,在卵母细胞体外培养体系中添加10-8mol/L、10-10mol/L RFRP-3可以显著降低卵母细胞成熟率（第一极体排出率）;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测发现RFRP-3显著降低卵丘扩展因子Has2、Ptgs2和Ptx3基因的表达,影响猪卵母细胞成熟。2.利用ELISA检测不同浓度RFRP-3对成熟促进因子（MPF）和环磷酸腺苷（cAMP）分泌的影响,发现10-8mol/L、10-10mol/L RFRP-3可以显著降低猪卵母细胞MPF的浓度,但对cAMP无显著影响;其次,通过放射免疫法检测RFRP-3对COCs激素分泌的影响,结果显示RFRP-3可以显著的降低猪雌二醇（E2）和孕酮（P4）的浓度,且10-10mol/L RFRP-3可显著降低成熟标志因子（GDF9、BMP15）基因以及母系基因（CDK1、cyclin B1）mRNA表达水平。以上结果表明,10-10mol/L RFRP-3对猪卵母细胞成熟的抑制效应最明显。3.qRT-PCR与Western-blot结果表明,10-10 mol/L RFRP-3显著上调WNT/β-catenin通路转录因子β-catenin基因及蛋白水平的表达,但对配体Frizzled5基因及蛋白水平的表达无显著影响;同时发现添加WNT/β-catenin通路抑制剂FH535可显著逆转10-10mol/L RFRP-3对卵母细胞成熟的抑制效应。这些结果说明,RFRP-3可通过WNT/β-catenin信号通路抑制猪卵母细胞成熟。综上,猪卵母细胞表达RFRP-3;10-10 mol/L RFRP-3可通过下调卵丘扩展因子的表达水平,降低卵母细胞MPF和生殖激素（E2、P4）的分泌水平,降低卵母细胞成熟标志因子（GDF9、BMP15）基因以及母系基因CDK1和cyclin B1的表达水平抑制卵母细胞成熟;通过升高β-catenin表达水平使其积累从而激活WNT/β-catenin通路,参与调控猪卵母细胞的成熟。