【摘 要】
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目的:LKB1是关键抑癌因子,其编码基因的缺陷可导致LKB1蛋白的表达或者活性缺失,这与错构瘤性息肉的发生及多种器官癌变密切相关。重建LKB1的表达则可对肿瘤细胞产生生长抑制效
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目的:LKB1是关键抑癌因子,其编码基因的缺陷可导致LKB1蛋白的表达或者活性缺失,这与错构瘤性息肉的发生及多种器官癌变密切相关。重建LKB1的表达则可对肿瘤细胞产生生长抑制效应。探讨LKB1在细胞中的定位对研究其功能有重要作用。因此,本研究在人肺腺癌细胞A549中表达具有EGFP荧光标签的重组LKB1,并探讨重建LKB1表达对于A549细胞的生长抑制效应。方法:应用PCR方法扩增LKB1蛋白编码基因全长cDNA序列,并利用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-N1-LKB1和pEGFP-N1质粒分别转染A549细胞。分别在转染12h,24h,36h,48h,60h,72h时,用MTT法检测LKB1对A549细胞的影响;并用Western blot检测LKB1和p53在A549细胞中的表达量变化。结果:成功构建pEGFP-N1-LKB1重组质粒并转染A549细胞。在转染pEGFP-N1-LKB1和pEGFP-N1的A549细胞中观察到绿色荧光;转染pEGFP-N1-LKB1的A549细胞生长受到明显抑制,尤其在24h-48h时;Western blot检测结果表明转染pEGFP-N1-LKB1重组质粒的A549细胞中重建了LKBl的表达,且p53总蛋白表达和积累水平明显增高。结论:在A549细胞中成功表达N端带有绿色荧光标签的LKB1蛋白,重组LKB1可能通过调节p53来抑制细胞增殖。
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