论文部分内容阅读
目的:研究河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:取Wistar大鼠24只,直接开胸取心,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,随机分为3组(n=8):基础组、STH-2组和TTX组。基础组持续用K-H液灌注60min后取左心室标本作为缺血前对照;STH-2组和TTX组为缺血再灌注实验组,先用K-H液灌注60min,分别用STH-2和TTX心脏停搏液灌注使心脏停搏并保存60min,然后恢复灌注60min,取左心室标本送检。以上各组标本均采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组织化学法测定心肌组织中凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白、Bax蛋白和p53蛋白的表达,Western blot法定量检测各组心肌组织中Bcl-2蛋白表达情况。结果:与缺血前比较,缺血再灌注后心肌凋亡细胞数明显增多,心肌细胞凋亡指数STH-2组(11.20±0.79%)和TTX组(6.92±1.10%)均高于基础组(1.34±0.23%,P<0.01);再灌注后TTX组心肌细胞凋亡指数明显低于STH-2组(P<0.01)。免疫组织化学法检测到心肌细胞中Bcl-2蛋白阳性表达指数分别为TTX组22.63±1.10%、STH-2组13.51±0.67%和基础组2.52±0.58%,TTX组和STH-2组高于基础组(P<0.01),TTX组高于STH-2组(P <0.01)。Bax蛋白阳性表达指数分别为TTX组6.05±0.46%、STH-2组8.04±0.57%和基础组2.14±0.57%,TTX组和STH-2组高于基础组(P<0.01),TTX组低于STH-2组(P<0.01)。TTX组中Bcl-2/Bax为3.78±0.41,高于STH-2组的1.75±0.15和基础组的1.19±0.08(P<0.01)。p53蛋白在各组均未见明显阳性表达。Western blot法检测到心肌细胞中Bcl-2蛋白的相对蛋白含量分别为TTX组86.1±0.98%、STH-2组53.2±1.76%和基础组23.7±2.61%,TTX组和STH-2组明显高于基础组(P<0.01),TTX组明显高于STH-2组(P <0.01)。结论:与传统的STH-2心脏停搏液比较,TTX心脏停搏液能减少大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的数量,具有更好的心肌保护作用。其抑制凋亡的机制可能是通过上调抑制凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促进凋亡蛋白Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值来实现。