小鼠胎儿成纤维细胞经常作为饲养层细胞用于胚胎干细胞的培养。然而,使用胎儿成纤维细胞作饲养层受到细胞代次等因素限制,并且,制备小鼠胎儿成纤维细胞要消耗大量的实验动物。L-Wnt3a细胞是一种经遗传修饰的小鼠皮下结缔组织细胞,它能够稳定分泌Wnt3A蛋白。目前,还不清楚该细胞是否适合作为小鼠胚胎干细胞培养的饲养层细胞。本研究,使用丝裂霉素C处理L-Wnt3a细胞,并在MTT法的基础上测定处理后L-Wnt3a细胞的生长状况,将处理后的细胞用于小鼠胚胎干细胞的培养,并且获得了该细胞的条件培养基,进一步探讨了其在无饲养层条件下对小鼠胚胎干细胞的作用。结果显示,L-Wnt3a细胞在10μg/ml丝裂霉素C处理4h后,细胞的生长受到了显著的抑制,但细胞的活力状态不受影响。用处理过的L-Wnt3a细胞作为饲养层细胞,成功建立小鼠胚胎干细胞系。用L-Wnt3a细胞的条件培养基培养ES细胞时,小鼠胚胎干细胞在无饲养层条件下自我增殖能力良好,该条件下培养的ES细胞表达碱性磷酸酶、Oct4、Sox2、Nanog、E-cadherin (E-CAD)、SSEA-1等多能性因子,能够在体内、体外分化为三个胚层,也能够产生嵌合后代。