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本文主要建立高效液相色谱中用替代标准对不稳定化合物进行定量分析的方法,利用紫外分光光度计和高效液相色谱考察了在不同背景下,最大吸收波长分别在紫外光区和可见光区下化合物响应值的稳定性,从而考察替代标准法在高效液相色谱中进行实际定量分析应用的可行性。本文为食品中叶黄素的检测提供了一种不需要标准品的检测方法,得到的结果与外标法相比,具有准确度高,成本低等特点。本文主要做了以下几方面的工作：1.以紫外分光光度计和高效液相色谱仪为检测仪器,考察了最大吸收波长在紫外光区下的8种目标化合物(其中四种pKa<7,四种pKa>7)在不同流动相背景、溶剂背景条件下,响应值的稳定性。实验结果表明,最大吸收波长在紫外光区的化合物,其相应的稳定性受其本身pKa值的影响,同时受加入的改性剂种类的影响。在紫外分光光度计上,苯佐卡因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、绿原酸的紫外吸收值随溶剂背景的变化不大,较适合在不同溶剂检测背景条件下做标准品的替代物。在HPLC上,随着流动相背景的变化,苯佐卡因和对乙酰氨基酚的斜率几乎无变化。在同一改性剂,不同有机相比例背景下,这些目标化合物的响应值都是稳定的。所以,最大波长在紫外光区的化合物可用于HPLC上同一改性剂,不同流动相比例条件下,作为标准品的替代分析。2.以紫外分光光度计和高效液相色谱仪为检测仪器,考察了最大吸收波长在可见光区下的四种的目标化合物在不同溶剂背景(非水体系)条件下,响应值的稳定性,并考察了不同的目标化合物与叶黄素的校正因子的稳定性。实验结果表明,与紫外光区的目标化合物相比,最大吸收波长较长的物质受溶剂背景和流动相背景的影响更小,作为叶黄素的标准品的替代物时,在HPLC上的相对校正因子总体比较稳定,作为类似波长下的不稳定化合物的标准品的替代物可行；但要注意在叶黄素的检测时,应该尽量避免溶剂环境呈酸性,因为叶黄素在此环境下容易降解,导致测量结果不准确。对位红和苏丹红Ⅰ号的相对校正因子最稳定,最适合作为叶黄素标准品的替代物。3.在前述设定的实验条件下,用苏丹红Ⅰ号和对位红作为叶黄素标准品的替代品,对食品中的叶黄素进行定量分析；并对食品中叶黄素的提取过程进行了改进。实验结果表明,间接算得所选16种样品中叶黄素的含量相对于检测出的实际浓度的相对误差均小于3.5%,说明用苏丹红Ⅰ号和对位红代替叶黄素标准品对样品中叶黄素进行定量分析可行,并且能克服叶黄素标准品不稳定的缺点,降低分析成本；与传统的乙酸乙酯萃取法相比,用丙酮作为提取溶剂,更简便、快捷,提取效率高,分析结果稳定性好。