防御素是家禽先天免疫的重要效应分子，在宿主抵御致病性微生物入侵时起至关重要的作用。维生素D3（VD3）作为一种免疫调节剂，能直接诱导哺乳动物单核细胞、上皮细胞等细胞系中抗菌肽和相关免疫因子的表达。然而，家禽体内尚未发现VD3转化成1，25（OH）2D3活性形式的1α羟化酶。本研究旨在探讨VD3与鸡体内β-防御素表达之间的关系，同时也探讨了VD3对丝毛鸡生产免疫性能的影响，共包括以下六部分试验。 试验一注射VD3对丝毛鸡β-防御素表达的影响 本试验旨在研究腹腔注射VD3对丝毛乌骨鸡组织中β-防御素（β-defensins，AVBDs）、Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）、维生素D受体（vitamin D receptor，VDR）和24羟化酶（CYP24）基因表达的影响。采用实时荧光定量PCR方法检测VD3对6周龄丝毛乌鸡肝、肾、脾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和法氏囊中AVBDs、TLRs、VDR和CYP24基因的表达变化。结果表明，在注射VD3后24h内，6个AVBDs（AVBD-1、AVBD-5、AVBD-7、 AVBD-9、 AVBD-10和AVBD-12）、3个TLRs（TLR2、TLR6和TLR7）、VDR和CYP24基因在肠道组织中均有显著的表达上调；TLR2、TLR5、VDR、AVBD-6、CYP24和GAL-1基因分别在肝、肾、脾组织也有显著的表达变化。结果提示，AVBDs、TLRs、VDR和CYP24基因的表达变化可能是受VD3的诱导。 试验二注射沙门氏菌对丝毛鸡β-防御素基因表达的影响 本试验旨在研究腹腔注射灭活沙门氏菌对丝毛乌骨鸡组织中AVBDs和TLRs基因表达的影响。采用实时荧光定量PCR方法检测沙门氏菌对6周龄丝毛乌鸡胸腺、肝、肾、脾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和法氏囊中AVBDs和TLRs基因的表达变化。结果表明，在注射后32h内的不同时间点，8个AVBDs（AVBD-1、GAL-1、AVBD-5、AVBD-6、AVBD-7、 AVBD-9、 AVBD-10和AVBD-12）和5个TLRs（TLR1、TLR4、TLR5、TLR6和TLR7）基因在丝毛乌鸡胸腺、肝、肾、脾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和法氏囊中均有显著的表达上调。结果提示，在这9个组织中的8个AVBDs和5个TLRs基因的表达发生了大幅上调，AVBDs的表达可能是TLRs的介导所致。 试验三饲喂VD3对丝毛鸡β-防御素基因表达的影响 本试验旨在研究VD3饲喂剂量对丝毛乌骨鸡组织中AVBDs、TLRs、维生素D羟化酶结合蛋白（VDHA）和24羟化酶（CYP24）基因表达的影响。1-6周龄分别饲喂每千克饲料添加0、800、1600、3200和6400IU VD3的饲粮。采用实时荧光定量PCR方法检测VD3对6周龄丝毛乌鸡胸腺、肝、肾、脾、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和法氏囊中AVBDs、TLRs、VDHA和CYP24基因的表达变化。结果表明，在饲喂800、1600、3200和6400IU VD3的不同处理中，6个AVBDs（AVBD-1、AVBD-5、AVBD-7、 AVBD-9、AVBD-10和AVBD-12）基因在胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和法氏囊组织中的表达均有显著的影响；TLR2、TLR5、VDHA、AVBD-6、CYP24和GAL-1基因分别在肝肾脾组织也有显著的表达变化。结果提示，AVBDs、TLRs、VDHA和CYP24基因的表达变化是受VD3的诱导，且AVBDs的表达可能受TLRs、VDHA和CYP24基因的介导，其表达与VD3存在剂量依赖性，适宜的VD3饲喂剂量可以使β-防御素基因的表达上调。 试验四饲喂VD3对丝毛鸡组织中免疫因子的影响 本试验旨在研究VD3对丝毛鸡体内细胞因子IL-2和IL-18表达的影响，探讨其与细胞因子表达丰度的关系。采用VD3饲喂模型，利用实时荧光定量PCR技术检测细胞因子在胸腺、肠道和法氏囊中的表达变化。结果表明，长期饲喂6400IU的VD3有助于IL-18基因在丝毛鸡胸腺、法氏囊和肠道的表达上调。饲喂高剂量也有助于IL-2在十二指肠、法氏囊和盲肠的表达上调，但在胸腺、空肠和回肠中高剂量对其有抑制作用。结果提示，VD3剂量跟丝毛鸡体内细胞因子IL-2和IL-18表达丰度相关，但其对不同组织中的细胞因子的调节存在差异。 试验五饲喂VD3对丝毛鸡生长性能和免疫器官的影响 本试验旨在研究日粮中添加不同水平VD3对丝毛鸡生长性能和胸腺、脾和法氏囊组织的影响。选用7日龄仔鸡120只，随机分为6个处理，每个处理20羽。试验日粮参照中国地方鸡推荐标准配制，6个处理的日粮VD3水平分别为：0、400、800、1600、3200和6400 IU/kg。研究结果表明：在本试验范围内，增加日粮VD3水平可以改善丝毛鸡日增重和平均体重。随着日粮VD3水平的增加，脾脏和法氏囊组织的质量指数和细胞数随之提高，但不影响胸腺组织的质量指数和细胞数。由此可见，在试验范围内，提高日粮VD3水平可以显著提高丝毛鸡生长性能，显著增加脾脏和法氏囊组织的脾脏指数和法氏囊指数及其细胞数。 试验六丝毛鸡β-防御素的组织表达分布及其基因片段的克隆与序列分析 用设计的特异性引物，运用Real-time PCR方法分析了丝毛鸡6个β-防御素基因在不同组织中的分布，结果发现：AVBD-1、AVBD-5、AVBD-7、AVBD-9、AVBD-10、AVBD-12的表达广泛分布在胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和法氏囊组织中，但表达量有差异。同样采用RT-PCR方法扩增丝毛鸡β-防御素基因AVBD-10。通过克隆、测序获得AVBD-10基因的cDNA核苷酸序列，并提交到GenBank，比较分析其与GenBank中注册的防御素基因核苷酸序列的相似性，其核苷酸的相似性在88％～100％之间。利用DNAStar软件对所获得的丝毛鸡β-防御素AVBD-10基因进行系统发育树分析，结果AVBD-10与GenBank中注册的丝毛鸡防御素AVBD-10基因不在同一分支，可能是品种血缘不纯造成的差异。 总之，VD3能诱导丝毛鸡体内防御素AVBDs的表达，其诱导功能的发挥与TLRs、VDHA和Cyp24的介导有关；适宜的VD3饲喂剂量能上调组织中AVBDs、IL2、IL18基因的表达，提高生长性能和免疫器官质量指数。