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本实验应用酶切、连接、插入的方法,用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为筛选标记,构建了含EGFP的伪狂犬病病毒（PRV）Fa株转移载体质粒。在PRV Fa株BamHⅠ-7重组质粒的基础上,用限制性内切酶NcoⅠ酶切除去gE和11k基因及部分gI和部分28k基因后回收8.6Kb的目的片段,经T1DNA连接酶自身连接之后进行转化,经筛选鉴定,得到阳性转化子,命名为pPB7-1;用SalⅠ消化pPB7-1 DNA,除去gG及部分gD基因后回收约6.0Kb的目的片段,经T1DNA连接酶自身连接之后进行转化,得到的阳性转化子命名为pPⅠ;用EcoRⅠ和BamHⅠ消化pPⅠ DNA,除去EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ等酶切位点,回收约5.7Kb的电泳目的片段,以Klenow大片段酶对其末端进行补平,之后进行平端连接及转化,筛选得到的阳性重组子命名为pPⅠ-1:然后用KpnⅠ消化pPⅠ-1 DNA、回收目的片段（约5.7Kb）、补平、平端连接及转化,筛选白色菌落,得到的阳性重组子命名为pPⅠ-2。再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-Cl上含EGFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pPⅠ-2中gⅠ抗原基因起始密码子ATG下游的Stu Ⅰ位点,在选择培养基中筛选表达EGFP的转化子,构建了以gI为同源序列的含EGFP报告基因的转移载体质粒,其上含有EcoR Ⅰ、HindⅢ、BamⅠ和KpnⅠ四个单一的多克隆位点,命名为pPⅠ-2.EGFP。大小为7.7Kb经酶切、核酸分子杂交技术鉴定,结果表明该转移载体质粒的构建是成功的。