【摘 要】
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目的:探究缺氧缺血性脑病大鼠模型中钙敏感受体（calcium-sensing receptor,Ca SR）对钙调磷酸酶/活化T细胞核因子（Ca N/NFAT）通路的调控作用,研究缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）脑损伤后的免疫机制,为防治和减轻HIE的神经损伤提供新的思路。方法:随机选取150只7日龄健康清洁级SD大鼠分为6组:假手术组、HI
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目的:探究缺氧缺血性脑病大鼠模型中钙敏感受体（calcium-sensing receptor,Ca SR）对钙调磷酸酶/活化T细胞核因子（Ca N/NFAT）通路的调控作用,研究缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）脑损伤后的免疫机制,为防治和减轻HIE的神经损伤提供新的思路。方法:随机选取150只7日龄健康清洁级SD大鼠分为6组:假手术组、HIE组、NPS2390组、精胺组、NPS2390+精胺组、FK506组。造模后24 h用Longa评分观察其神经功能损伤程度;从HIE组中随机选取模型鼠为干预组进行早期运动干预训练至21日龄,悬吊试验、平面翻正试验、斜板试验观察假手术组、HIE组与干预组运动功能;HE染色、电镜观察其余各组大鼠脑皮质和海马神经细胞形态;免疫组化、蛋白免疫印迹、荧光实时定量PCR技术观察各组后大鼠脑组织中Ca SR、Ca MKⅡ和Ca N/NFAT通路蛋白表达变化。结果:根据Longa评分和形态学结果证明HIE模型建立成功。干预组悬吊试验时长优于HIE组,平面翻正试验、斜板试验时间明显较HIE组缩短,早期康复干预能够改善HIE模型大鼠的运动功能障碍。HE染色和电镜结果显示,HIE组神经细胞较假手术组有明显损伤,精胺能够加重HIE大鼠脑组织神经损伤,NPS2390和FK506减轻HIE大鼠神经细胞病理性改变。免疫组化结果表明,在海马CA3区中,HIE组Ca SR、Ca N表达显著高于假手术组（P<0.05）,精胺组Ca SR、Ca N表达高于HIE组,NPS2390组、NPS2390+精胺组（P<0.05）,FK506组表达低于HIE组（P<0.05）。脑皮质中,Ca SR表达HIE组高于假手术组（P<0.05）,精胺组表达高于HIE组（P<0.05）,NPS2390组、NPS2390+精胺组、FK506组表达低于HIE组（P<0.05）。而Ca N表达则无明显差异。蛋白免疫印迹结果表明,HIE组Ca SR、Ca MKⅡ、Ca N和NFAT蛋白表达高于假手术组,精胺组Ca SR、Ca MKⅡ、Ca N、NFAT表达高于HIE组,NPS2390组、FK506组Ca SR、Ca MKⅡ、Ca N、NFAT表达低于HIE组,NPS2390+精胺组Ca SR、Ca MKⅡ、Ca N表达低于HIE组,NFAT表达高于HIE组。结论:在HIE模型鼠中,Ca SR表达加重神经细胞的损伤;Ca SR能够激活Ca N/NFAT通路表达,抑制Ca N/NFAT通路可以对HIE模型鼠海马神经细胞起到保护性作用;早期康复干预的介入能够改善HIE模型大鼠的运动功能障碍。
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